BC細胞の共培養:がん細胞の増殖を研究するための骨片を用いた乳がん細胞の培養

まず、ボーンワックスをTest and Controlとラベル付けした2つの細胞培養プレートに入れます。乳がん細胞を発現する生物発光を各プレートの中心に適量ピペットで注入し、プレートを一定時間インキュベートして細胞の接着を助けます。テストプレートの骨ワックスに小さな骨外植片を置き、圧力を加えて固定します。

成長サプリメントであるウシ胎児血清を含む細胞培養培地を各プレート面にゆっくりと注ぎ、外植片を沈め、摂氏37度で一定時間インキュベートします。試験プレートの骨組織は、サイトカインやSRCキナーゼなどの可溶性因子を放出し、乳がん細胞を引き付けて移動させます。各プレートに基板を追加し、プレートを生物発光イメージングチャンバーに置きます。

生物発光タンパク質を発現するがん細胞は、基質を酸化して発光します。ソフトウェアを使用して各細胞から放出される総光子を測定することにより、増殖を定量化します。テストプレート内のがん細胞は、コントロールプレート内の細胞よりも速く増殖するはずです。次のプロトコルでは、大腿骨外植片に隣接する乳がん細胞を共培養して、乳房細胞の増殖を測定します。

この実験では、DMEM 50 マイクロリットルあたり 100,000 個の細胞と 10% FBS を含む乳がん細胞懸濁液を調製します。さらに、骨片を固定するための骨ワックスのプラグを準備します。マイクロピペットチップの切り口の端を使用して、プラグをシャーレに保管します。次に、鉗子でプラグを6ウェルプレートに移し、滅菌手袋を使用してプラグを12時の位置に押し込みます。

次に、細胞懸濁液の50マイクロリットルを各ウェルの中央にピペットで移します。プレートを組織培養インキュベーターに45分間置き、細胞の接着を促進します。プレートがインキュベートしている間に、骨片を抽出します。細胞をプレートに付着させた状態で、骨組織片を3ウェルの骨ワックスに置き、ロンゲールを使用してそれぞれを押し下げます。フラグメントのない3つのウェルがコントロールとして機能します。

次に、5ミリリットルのDMEMと10%FBSを各ウェルの壁にゆっくりと加えます。骨のワックスと骨片は外れてはなりません。その後、培養物を20〜24時間インキュベートします。翌日、細胞を画像化します。まず、各ウェルに1ミリリットルあたり300マイクログラムのルシフェリンを添加し、次にすぐにIVISイメージングプラットフォームでプレートをイメージングします。