管内注射:マウス乳腺の管に注射ミックスを送達する

管内注射は、がん細胞、発現ベクター、またはトレーサー色素を添加した治療薬を含む可能性のある注射混合物を乳腺の管に送達する技術です。

この手順では、注射器に注射液をセットします。次に、麻酔をかけたマウスの腹側を上にして手術用ベッドに置きます。乳腺の鼠径部または5番目のペアの間の皮膚を切開します。皮膚フラップを頭頂腹膜から慎重に分離して、乳管樹を視覚化します。

鉗子を使用して乳首を持ち上げ、ダクト開口部が見えるように外側部分を慎重にカットします。ピンセットを使用して皮膚フラップの端を持ち上げ、シリンジ針を乳首にそっと挿入して注射ミックスを送達します。トレーサー染料が乳管樹に移動するのを監視します。染料は間質に漏れることなく管状樹に広がり、注入が成功したことを示します。

こぼれないように数秒待ってから、注射部位から針をゆっくりと取り外します。.傷口クリップで切開部を閉じます。以下のプロトコールでは、Creを発現するアデノウイルスをマウスの乳腺に送達するための管内注射を行います。

外科的処置全体を通して無菌技術を使用します。2つの第4鼠径乳腺の間に約1センチメートルの長さで皮膚に切開部位を作ります。乳管樹を視覚化するために、皮膚フラップを頭頂腹膜から慎重に分離します。

時計職人の鉗子で乳首を慎重に保持し、マイクロ解剖ハサミを使用して近くの皮膚を切らずに外側の乳首を取り外します。約3〜5マイクロリットルのCreアデノウイルス注射混合物を、33ゲージの金属ハブ針を取り付けた25マイクロリットルのハミルトンシリンジにロードします。.

シリンジ内の注射混合物の量を、混合物に含まれる青色の染料に基づいて推定します。細かい湾曲したピンセットで皮膚フラップの端をそっと保持し、乳管樹への青色染料の広がりを監視しながら、Creアデノウイルス注射混合物を乳首にゆっくりと注入します。管内腔の損傷を避けるために、注入速度をできるだけ遅く保

ちます。

管内注射が成功すると、注入された液体が間質コンパートメントに漏れることなく、管状樹木全体に広がることによって示されます。注入された液体の漏れを避けるために、針を乳首からそっと引き抜きます。乳腺の遠位側または注射された乳首の周辺領域を調べます。.

ここに示すように、近くの間質に拡散する色素は、乳管内注射が成功したのではなく、乳腺脂肪パッド注射が成功したことを示しています。手術創と皮膚を創傷クリップで閉じます。

マウスを麻酔から外し、回復のために清潔なケージ内の加熱パッドに置きます。テキストプロトコルに記載されているように、乳腺腫瘍の発生を監視します。