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ゼブラフィッシュの胚異種移植片は、がん細胞の浸潤を研究するのに役立ちます。蛍光標識された転移性がん細胞と非がん性細胞を2つのトランスジェニック胚の周縁腔に注入することにより、異種移植モデルを調製します。ペリビテリン腔は、胚の周皮と卵黄嚢との間の空間です。胚を希望の期間成長させます。
この期間中、転移性がん細胞は注射部位で積極的に分裂しますが、非がん細胞は安定しています。インキュベーション後、パスツールピペットを使用して胚をガラス底の懸濁皿に移します。余分な卵水を取り除き、イメージングのために胚を希望の位置に配置します。皿の上にカバースリップを置き、皿を明るい視野顕微鏡の下に置きます。
画像をキャプチャし、両方のタイプの細胞の侵襲的挙動を分析します。転移性がん細胞は、注入部位から血管に浸潤する傾向があります。それらは循環に沿って移動し、その後、周囲の組織に侵入して増殖します。対照的に、非癌性細胞は注射部位に残ります。プロトコル例では、ゼブラフィッシュ異種移植モデルのキュビエのビテリン周囲腔と管に乳がん細胞を注入して、転移を研究します。
転移を可視化するには、パスツールピペットで、注入したゼブラフィッシュの胚をガラス底ポリスチレン皿に移し、余分な卵水分を取り除きます。低倍率に設定された共焦点顕微鏡で胚の全身を画像化し、腫瘍細胞播種の一般的なパターンを取得します。
488ナノメートルのレーザーを使用してゼブラフィッシュの胚の血管系を視覚化し、543ナノメートルのレーザーを使用して、赤色蛍光マーカーで標識された移植された腫瘍細胞を視覚化します。次に、胚を8〜10ステップでスキャンして、高品質の画像を取得します。
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