インドインクの膨張:腫瘍結節を視覚化するための染色法

まず、安楽死させたマウスの腹側を上にして手術用ベッドに置き、動物の手足を固定します。はさみを使用して、胸郭を通って唾液腺まで正中線に沿って切ります。気管の下にピペットチップを置き、気管を持ち上げて隔離します。手術用ベッドを180度回転させます。インディアインクの染みが入った注射針を気管に挿入し、抵抗を感じるまでインクを肺に注入します。

がん細胞は乳酸を大量に分泌し、細胞表面に強い負電荷を発生させます。これらの細胞を酸性染色である墨で染色すると、細胞表面は染色をはじき、染色されないままになります。

はさみを使用して気管を切断し、ピンセットを肺の下にスライドさせます。動物の体から肺をそっと引き出します。肺を水ですすぎ、フェケテ溶液が入ったバイアルに移して余分な汚れを取り除き、組織をヒュームフードに固定します。腫瘍結節は、暗い背景に対して白く見えます。

次のプロトコルでは、肺の転移を検証するためにインドのインク膨張技術を実行します。

原発腫瘍の肺への転移を検証するには、まずマウスをポリスチレンボードの仰臥位に置き、脚を固定して気管へのアクセスを妨げないようにします。マウスに70%エタノールをスプレーします。次に、ハサミを使用して、マウスの中腹部の正中線に沿って胸郭を通って唾液腺に向かって切開します。気管を特定します。次に、鉗子を使用して周囲の組織を取り除きます。

次に、ピペットの先端を片手で持ち、先端を気管の下に通し、組織をゆっくりと持ち上げて体から離します。気管を持ち上げたまま、解剖プラットフォームを180度回転させます。次に、半ccの27ゲージツベルクリン注射器を気管に挿入し、強い抵抗が感じられるまでインドインクで肺を完全に膨らませます。

次に、はさみを使用して、気管を切断します。1つの鉗子でマウスを所定の位置に保持し、別の鉗子を肺の下に挿入し、マウスから肺葉を引き抜きます。水のビーカーで肺を短時間すすぎ、組織をヒュームフードに移します。次に、3ミリリットルのフェケテ溶液が入ったガラスシンチレーションバイアルに肺を入れ、バイアルをキャッピングして溶液が蒸発するのを防ぎます。数分後、肺をペトリ皿に移し、単一の白い転移性腫瘍結節の数を数えます。