乳腺脂肪パッドの脱細胞化:乳腺脂肪パッドからの細胞外マトリックスハイドロゲルの誘導

まず、トリプシン-EDTA溶液を入れた皿に乳腺脂肪パッドまたはMFPを置き、細胞マトリックスの接着を切断するために所望の期間インキュベートします。MFPを脱イオン水で洗い、ストレーナーで濾します。攪拌棒付きのビーカーにティッシュを入れ、Triton X-100を加えます。組織の細胞外マトリックスの成長因子に影響を与えずに細胞を攪拌して溶解します。

MFPを濾し、脱イオン水ですすいでください。組織をビーカーに戻し、デオキシコール酸を加えて残りの細胞を溶解します。次に、MFPを濾し、汚染を防ぐためにペニシリン-ストレプトマイシンを含む脱イオン水を入れたビーカーに入れます。ビーカーを摂氏4度で一晩インキュベートします。

MFPを濾し、エタノールと過酢酸を含むビーカーに入れます。過酢酸は、組織の細胞外マトリックスの剛性を高めます。しばらく攪拌し、濾しのステップを繰り返します。MFPをPBSで洗浄し、次に脱イオン水で洗浄します。濾した複合機をプロパン-1-オールを含むビーカーに移します。

しばらく攪拌し、内容物を濾し、MFPを脱イオン水で洗います。MFPを乾燥させ、マイナス80°Cで保管します。次のプロトコルでは、マウスの乳腺脂肪パッドの脱細胞化を行います。

まず、MFPを5ミリリットルのトリプシンEDTA溶液を含む6センチメートルの皿に入れます。70%エタノールを皿にスプレーして拭き取り、摂氏37度で1時間インキュベートします。0.7mmのストレーナを使用して、ティッシュに水を3回注ぎ、MFPを脱イオン水で洗います。鉗子を使用して、洗浄の合間に組織を手動でマッサージします。

次に、デリケートなタスクワイプでティッシュを短時間乾燥させ、重量を量ります。乾燥した組織を、適切なサイズの攪拌子が入ったオートクレーブ済みのビーカーに入れ、組織1グラムあたり60ミリリットルの3%t-オクチルフェノキシポリエチレンエタノールで組織を覆います。室温で1時間撹拌します。次に、ビーカーの中身をストレーナーに捨てます。

ビーカーを脱イオン水ですすぎ、これをティッシュに注ぎます。このすすぎプロセスをさらに2回繰り返し、すすぎの合間に鉗子を使用して組織を手動でマッサージするようにしてください。この後、デリケートなタスクワイプでティッシュを短時間乾かし、重量を量ります。ティッシュとスターバーを同じビーカーに戻し、ティッシュ1グラムあたり60ミリリットルの4%デオキシコール酸で覆います。室温で1時間撹拌します。

次に、ビーカーの中身をメッシュストレーナーに捨てます。ビーカーを脱イオン水ですすぎ、これをティッシュに注ぎます。このすすぎプロセスをさらに2回繰り返し、すすぎの合間に鉗子を使用して組織を手動でマッサージするようにしてください。すすいだティッシュを繊細な作業で短時間乾かし、拭き取り、重さを