腺癌の生着:マウスの肺に癌細胞を移植する方法

- まず、がん細胞の生着の数日前にマウスに非リボソームハイブリッド薬であるブレオマイシンを気管内に注射し、肺に線維化を誘導します。次に、組織培養液中で肺がん細胞株を増殖させます。PBSで細胞を希釈することにより、がん細胞懸濁液を調製します。ケタミン-キシラジン溶液を腹腔内に注入して、前処理されたマウスに麻酔をかけます。.

次に、マウスを挿管プラットフォームに置き、マウスの前歯をプラットフォームに背を向けて吊るします。口を開けて、舌をそっと引き出します。上部が前歯に達するまでカテーテルを気管に配置し、気管内のがん細胞懸濁液を所望の量分注して、肺の生物発光がん細胞を生着させます。

マウスがボリューム全体を吸い込むまで待ちます。カテーテルをそっと取り外し、マウスを回復パッドの上に置きます。数日後、ルシフェリンを眼窩後方に交互に注入し、マウスをイメージャーの上に置きます。

がん細胞は、酸素の存在下でルシフェリンをオキシルシフェリンに変換し、光を発するルシフェラーゼを産生します。ルミノスコアを計算することにより、肺の腫瘍量を監視するための画像を取得します。以下のプロトコールでは、マウスの肺腺がん細胞の生着を行います。

このプロトコルでは、最初にマウスにブレオマイシンを注射する必要があります。その後、14日後に腫瘍細胞を注入します。両方の注射の手順は非常に似ており、ここで説明します。

注射の2時間前に、ブレオマイシンストックを氷上で解凍し、使用濃度まで希釈します。氷の上に置いてください。細胞ボーラスの場合、テキストプロトコルに記載されているように細胞懸濁液を調製してください。各マウスの処置時間は全部で約10分です。つま先をつまんで適切な麻酔を確認し、獣医の軟膏を目に塗ってください。

このとき、マウスの毛が黒い場合は、肋骨の腹側と背側の両方を剃り、正しく画像化できるようにします。次に、マウスを前歯で固定し、背をプラットフォームに当ててマウスを挿管プラットフォームに置きます。細胞ボーラスを注入する場合は、穏やかなトリチュレーションで今すぐ再懸濁します。.

次に、胸の上部を照らし、口を開けて、平らな鉗子を使用して舌をそっと引き出します。針を取り外して気管用のIVカテーテルを準備し、気管開口部の上に配置します。次に、カテーテルの上部が前歯に近づくまでカテーテルを気管に挿入し、カテーテルの内部を照らして配置を確認します。

次に、50マイクロリットルの新しく作られたブレオマイシンまたは細胞懸濁液を直接カテーテルに分注します。ボリューム全体がカテーテルを下って移動するまで数秒待ちます。その後、カテーテルを取り外し、10%漂白剤で廃棄します。

- マウスが液体を吸い込んでいない場合は、マウスの呼吸を注意深く監視し、カテーテルの位置を調整します。マウスの呼吸が止まった場合は、すぐにカテーテルを取り外し、マウスに息を止めてからカテーテルを再挿入します。

- カテーテルを抜去した後も、治療したマウス5匹を麻酔したまま画像化できるように、手順を続けます。回復のためには、IACUCで証明された加熱パッドにマウスを仰臥位で置き、回復ケージに入れ、完全に回復するまで監視します。