フローサイトメトリーのためのマウス肺調製:フローサイトメトリー解析のための肺組織からの細胞懸濁液の生成(英語)

0 閲覧数3:48 • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- まず、安楽死させたマウスを採取し、実験用テープで解剖ボードに固定します。ハサミを使って皮膚を切り開きます。横隔膜を垂直に切開し、肋骨を切開して胸腔に到達し、心臓と肺を露出させます。次に、心臓の左心室に小さな切開をします。続いて、右心室の位置を特定し、PBSを含む注射器を心室の内腔に挿入します。右心室からPBSを灌流し、肺が白くなるまで左心室の既成切開部から血液が流れ出るようにします。腫瘍結節を含む肺組織を取り出し、細かく刻みます。

肺消化緩衝液で断片をインキュベートします。肺消化バッファー中のコラゲナーゼは細胞の単離に役立ち、DNAseは死んだ細胞からDNAを排除するのに役立ちます。得られた懸濁液を細胞ストレーナーで濾して凝集物を取り除き、細胞懸濁液を均一にします。ペレットを遠心分離し、塩化アンモニウムカリウム緩衝液に再懸濁して、残留赤血球を溶解します。遠心分離機でペレット中のWBCと腫瘍細胞を採取します。ペレットをFCSを添加したPBSに再懸濁して、細胞の安定性を維持します。次のプロトコルでは、フローサイトメトリー分析のための肺細胞懸濁液の調製を示します。

適切な実験エンドポイントの後、死体を70%エタノールに浸し、動物を解剖ボードに固定します。.腹側正中線切開を行い、皮膚を穏やかに反転させて胸壁の筋肉と腹部の臓器を露出させます。はさみを使用して横隔膜に穴を開け、胸腔を露出させる肋骨を切断します。左心室に小さな開口部を切り取り、27ゲージの針を使用して、注入ごとに6〜8ミリリットルの氷冷PBSで右心室から肺を3回灌流します。最後の灌流後、肺からは完全に血液が排出され、白く見えるはずです。収穫後、はさみを使って肺組織を細かく刻みます。

肺の断片を1.5ミリリットルの肺消化緩衝液が入った2ミリリットルの微量遠心チューブに移し、37°Cで振とうしながら30〜60分間インキュベートします。消化の最後に、細胞懸濁液を70ミクロンの細胞ストレーナーを通して50ミリリットルのチューブに移し、滅菌済みの10ミリリットルのシリンジプランジャーの端を使用して、残りの組織片をフィルターに押し込みます。2% FCSを添加した15ミリリットルのPBSでストレーナーをすすぎ、遠心分離により細胞を回収します。ペレットを1ミリリットルの塩化アンモニウムカリウム溶解緩衝液に再懸濁し、室温で5分間インキュベーションし、細胞を再度遠心分離します。次に、白血球ペレットを2%FCSを添加したPBS1ミリリットルに再懸濁し、実験プロトコルに従ってフローサイトメトリー分析のために細胞を染色します。

07:03

gentleMACS Dissociatorを使用してマウスの肺組織からの単細胞懸濁液の標準化の準備

関連動画

0 再生回数

16:55

ヘキストの分離および特性評価 CD45マウス肺間葉系幹細胞

関連動画

0 再生回数

11:02

免疫組織化学およびフローサイトメトリーを用いた気管支生検における空間分布と表現型の同定:ヒト肺樹状細胞

関連動画

0 再生回数

08:01

フローサイトメトリーによる肺および肺リンパ節の分析とマウスの非外科的気管内注入

関連動画

0 再生回数

09:04

マウス肺樹状細胞の分離

関連動画

0 再生回数

14:48

機能と分子生物学的研究のためのプライマリマウスII型肺胞上皮細胞のフローサイトメトリ分離

関連動画

0 再生回数

09:09

離とマウスとヒトの肺胞マクロファージの体外培養

関連動画

0 再生回数

09:00

肺環境における免疫細胞および炎症誘発性メディエーターの特性評価

関連動画

0 再生回数

09:57

マウス肺の自然免疫細胞および適応免疫細胞の同定のためのフローサイトメトリー分析

関連動画

0 再生回数

09:49

肺炎の治安を評価するための実験モデル

関連動画

0 再生回数

最終更新:15 8月 2026