JoVE 実験百科事典
がん研究
0 回視聴 • 3:59 分 • April 30th, 2023
- 光線力学療法またはPDTは、光増感剤分子を含む光ベースの治療法です。これらの分子は、特定の波長の光によって活性化され、細胞内に存在する酸素分子を活性酸素種に変換して細胞死を誘導します。まず、麻酔をかけたマウスの下腹部に適切な濃度の肺がん細胞懸濁液を注入することにより、肺腫瘍担体マウスモデルを開発します。腫瘍が適切な体積に成長するまで監視します。
続いて、肺がんを標的としたナノ粒子ベースの送達システムにロードされた所望の光増感剤の懸濁液を調製する。この懸濁液を麻酔した腫瘍担存マウスの尾静脈に注入します。ナノ粒子を含む光増感剤が腫瘍部位に到達し、がん細胞に侵入するまでに十分な時間を確保します。
次に、マウスに麻酔をかけます。PDTレーザーを腫瘍の最適な距離に配置して、腫瘍全体の体積が均一に照らされるようにします。腫瘍を適切な波長で希望の時間に照射します。マウスを暗闇のケージ内に24時間保持します。腫瘍体積の日々の変化をモニタリングします。放射線照射した担腫瘍マウスに光増感剤を注射したところ、腫瘍体積の減少が認められました。このプロトコルでは、A549担がんマウスのヒアルロン酸セラミドナノ粒子にカプセル化された光増感剤であるヒポクレリンBの抗腫瘍効果を分析します。
A549細胞を回収し、100万個の細胞を0.1ミリリットルのRPMI 1640培地に再懸濁します。再懸濁したセルを氷上に置きます。次に、BALB/Cオスヌードマウスを注射用に調製します。次に、26ゲージの針を備えた1ミリリットルの注射器に細胞をロードし、マウスの左側面に注入します。毎日ノギスで腫瘍のサイズを測定します。
腫瘍の大きさが約200立方ミリメートルに達したら、まず各マウスの体重を量ることから実験を開始します。次いで、PBS中のナノ粒子を最終濃度2ミリグラム/ミリリットルに溶解し、マウス1グラム当たり1マイクロリットルの懸濁液を26ゲージ針を備えた1ミリリットルの注射器に装填する。0日目と7日目に尾静脈注射でナノ粒子を注入します。
各注射の24時間後に、マウスに麻酔をかけ、腫瘍の種雄を光線力学療法のファイバーの下に置き、ファイバーから1センチメートル離れるようにします。
最良の結果を得るためには、腫瘍表面全体を光で覆うことが重要です。
レーザー安全メガネを装着し、部屋のスイッチをオフにし、1日目と8日目の両方で光線力学療法レーザーで500秒間腫瘍を照らします。レーザー治療後、マウスをケージ内の暗闇で24時間維持します。腫瘍の体積と腫瘍部位の変化を毎日視覚的に監視します。ノギスを使用して腫瘍のサイズを測定し、腫瘍部位の写真を毎日撮影して表面の変化を確認します。