肺の点滴と固定:気管に液体を導入し、肺を固定して固定された肺容量を測定する

- 肺点滴は、がんやその他の病状を持つマウスの肺を分析するために、物質を気管に直接導入するために使用されます。まず、傾斜した挿管プラットフォームに麻酔をかけたマウスを装着し、首の毛を剃ります。首の下にハサミで小さな切開を行い、鉗子を使用して皮膚をそっと引っ張って気管を露出させます。口から気管にカテーテルを挿入し、切開部を通して観察します。サンプルの液体を気管に注入し、空の注射器で空気を導入して肺を急速に膨らませ、液体を適切に分配します。

傷口を閉じ、マウスを回収室に入れます。所望の期間の後、マウスを犠牲にし、肺を露出させます。固定剤で膨らませて、総肺活量を定量化します。肺を固定剤の入ったチューブに入れます。アルキメデスの原理を使用して固定肺活量を測定します。肺を水に入れ、有線デバイスで押します。水没した肺によって押しのけられた水の重さに注意してください。固定された左肺の肺容積の割合は、通常、in vivoで測定されたものよりも小さくなります。

- 手順を開始する前に、市販の1インチの長さ20ゲージの静脈内カニューレの先端を手動でわずかなカーブに曲げます。その後、つま先のつま先つまみに反応しないことで麻酔を確認した後、成体マウスの目に軟膏を塗布し、大きなオフィスバインダーと縫合糸ループを備えた傾斜したプラットフォームにマウスを仰臥位に固定します。首の腹側部分を剃り、70%アルコールで皮膚を消毒します。次に、鋭利なハサミを使用して、下切歯の約12ミリメートル下にある首に小さな外科的切開を行います。

次に、鉗子を使用して、気管の腹壁が見えるまで首の皮膚を尾側にそっと引っ張ります。次に、舌をそっと引っ込め、曲がった先端をマウスの腹面に向けて傾けてカニューレを挿入します。先ほど示したように、再び首の皮膚を優しく引っ張り、カニューレを気管に挿入します。気管内にカテーテルが観察できるようになったら、声帯を通すようにカテーテルを約5ミリ進めます。

次に、50マイクロリットルの点滴液をロードしたゲルローディングピペットの先端をカテーテルの下部ハブに配置します。マウスの呼吸と同期して先端内の液体の動きを確認し、点眼液を注入します。1ミリリットルの注射器を使用して、カテーテルを通して0.6ミリリットルの空気ですぐに肺を膨らませ、液体を肺の奥深くに分配してから、カニューレを取り外します。少量のシアノアクリレート接着剤で外科的創傷を閉じ、マウスが完全に回復するまでモニタリングしながらマウスを個々のケージに入れます。

最終的な実験時点の後、動物の首に小さな切り込みを入れて、気管の腹側を露出させます。次に、18ゲージのスタブ針先を気管に挿入します。糸を使用して針を気管に結び、正中線切開で胸部を慎重に開きます。次に、横隔膜を切り取り、胸壁の外側を取り除き、肺を露出させます。次に、ストップコックの端にホルムアルデヒドを流して、固定チューブに空気がないことを確認します。次に、ホルマリンリザーバーと充填チューブを気管切開針の下端に直接接続します。

ホルムアルデヒドの上面を口の高さから25センチメートル上に置き、ストップコックを開いて固定剤で肺を膨らませます。肺を少なくとも20分間圧力下に置いた後、針をゆっくりと引き戻して、スタブ針の端を超えて気管を結びながら、カニューレのない気管をさらに露出させます。気管がしっかりと結ばれたら、ストップコックを取り外し、肺を慎重に解剖します。次に、肺をホルムアルデヒドに一晩置きます。

ここでは、プラスチック製のピペットと細い20ゲージのワイヤーで作られた固定肺容量中に肺を所定の位置に保持するための典型的な装置が示されています。固定肺活量を測定するには、まず心臓と肺から他の非肺組織を解剖します。次に、ワイヤー支持装置を装着した約200ミリリットルの水が入ったビーカーを天びんに載せ、風袋引きをします。

次に、デバイスを取り外し、肺を水面に置き、肺、縫合糸、またはデバイスの一部がビーカーの側面または底に触れないように注意しながら、デバイスを使用して組織を水中で押します。天秤に重量を記録します。この数値は、変位した水の量を反映しているため、肺活量の直接的な尺度です。次に、ワイパーで肺を乾かし、ビーカーを再びデバイスで風袋引きし、肺活量の測定を繰り返します。次に、2つの体積測定値を平均化する必要があります。