BrdU免疫蛍光染色:細胞周期の異なる段階にある細胞を同定する技術

0 閲覧数3:24 • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- ブロモデオキシウリジンまたはBrdUは、合成チミジンヌクレオシド類似体です。細胞周期の合成段階では、BrdUはチミジンを置換し、新たに合成されたDNAに組み込みます。組み込まれたBrdUにより、細胞周期の進行を追跡できます。取り込まれたBrdUを検出するには、まず細胞を固定して透過処理し、透過性にします。

次に、細胞をDNAse酵素で処理してDNA鎖を切断し、取り込まれたBrdUを露出させます。続いて、適切な蛍光標識抗BrdU抗体を添加します。抗体は核に入り、DNAに存在する曝露されたBrdUに容易に結合します。

さらに、適切な蛍光DNA結合色素で細胞を処理します。色素はDNAに結合するため、総DNA含有量の定量化が可能になります。フローサイトメトリーを使用して、標識されたBrdUとDNAの両方からの蛍光を検出します。

標識されたDNAからの蛍光強度は、総DNA含有量の変動に基づいて、異なる細胞周期相の細胞を分化します。BrdUからの蛍光シグナルは、BrdUで取り込まれた細胞の現在の細胞周期の位置を特定します。

この例では、NALM-6--急性リンパ芽球性白血病細胞のBrdU免疫蛍光染色を行います。

- 抗体染色の前に、細胞をDNAseで処理します。細胞を100マイクロリットルのDNAse溶液に再懸濁し、摂氏37度で1時間インキュベートします。1ミリリットルの洗浄バッファーを加え、細胞を遠心分離し、上清を捨てます。BrdU以外の細胞内マーカーの抗体染色は、BrdU染色と同時に行うことができます。

- 未染色の細胞と各蛍光色素で標識された細胞からなるコンペンセーションコントロールを調製することが重要です。コンペンセーションコントロールには、実験用チューブに使用した抗体と同じ抗体を使用するのが理想的です。

- BrdU抗体の6細胞に10個あたり1マイクロリットルの50マイクロリットルの洗浄緩衝液に細胞を再懸濁した。他の特異的な細胞内抗原に対する抗体を使用する場合は、この時点で抗体を追加する必要があります。細胞を室温で20分間インキュベートします。

20分後、前述したように1ミリリットルの洗浄緩衝液で細胞を洗浄します。最後に、細胞周期解析のためにDNAを染色します。チューブをフリックしてペレットをほぐし、20マイクロリットルの7-AAD溶液を追加します。細胞ごとに一定量の7-AADを使用することが重要です。細胞を1ミリリットルの染色緩衝液に再懸濁します。その後、フローサイトメトリー解析を行います。

11:23

代謝標識とフローサイトメトリーで細胞周期の進行速度を測定

関連動画

0 再生回数

09:39

中心体におけるタンパク質レベルの変化を測定するための定量的免疫蛍光アッセイ

関連動画

0 再生回数

12:34

質量細胞血症による細胞タンパク質発現の細胞周期特異的解析におけるマウス皮膚ケラチノサイトの単離と染色

関連動画

0 再生回数

12:19

哺乳動物細胞における細胞周期の位置の解析

関連動画

0 再生回数

03:59

ブロモデオキシウリジンパルス標識アッセイ:細胞増殖を測定する技術

関連動画

0 再生回数

03:37

がん細胞における複製ストレスを定量するための免疫蛍光法

関連動画

0 再生回数

08:52

同期を必要とせずに、フローサイトメトリーを用いた細胞周期の進行の時間追跡

関連動画

0 再生回数

08:37

ピリミジン類似体である5-ヨード-2'-デオキシウリジン(IdU)と細胞周期マーカーを使用して、マスサイトメトリープラットフォームで細胞周期相を確立します(英語)

関連動画

0 再生回数

08:37

チミジン類似体BrdUを用いたラットの細胞増殖と神経新生を解析するための免疫組織化学技術

関連動画

0 再生回数

06:44

BrdU-DNA標識と細胞周期判別イメージングを用いたグローバルDNA二本鎖末端切除の評価

関連動画

0 再生回数

最終更新:15 8月 2026