May-Grunwald Giemsa染色:骨髄細胞を染色する方法

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- May-Grunwald Giemsa、またはMGG染色は、骨髄細胞(BMC)の鑑別染色のための2段階の手順です。染色を開始するには、スライドガラス上にBMCの濃縮単層塗抹標本を取得します。塗抹標本を自然乾燥させます。まず、メタノールに溶解したエオシンとメチレンブルーを含むMay-Grunwald染色で細胞を処理します。

溶媒メタノールは最初に細胞を固定します。メチレンブルーは、正味の正電荷を持つ塩基性色素で、核酸などの酸性細胞成分を染色します。エオシンは、正味の負電荷を持つ酸性色素で、細胞質カチオン性タンパク質などの基本的な細胞成分を染色します。細胞をpH 6.8の緩衝液で処理して、色素が沈殿し、細胞材料と良好に結合できるようにします。

さらに、酸性色素と塩基性色素を含むギムザ染色で細胞を処理し、全体的な染色効果を高めます。塩基性染料であるアズールとメチレンブルーは酸性成分の汚れを強め、酸性染料であるエオシンは塩基性成分の汚れを増強します。

顕微鏡下では、赤血球はピンクがかった茶色に見え、血小板は小さな紫色の点として現れます。顆粒球は、紫青色の多葉核と赤い顆粒状の細胞質を示します。無顆粒球は、大きな紫ピンクの核を持つ透明な青色に見えます。以下のプロトコールでは、骨髄細胞のMGG染色を示します。

- 骨髄細胞を染色用に調製するには、まず、フィルターカードがあらかじめ取り付けられた使い捨てチャンバーにスライドし、チャンバーを細胞遠心分離機に入れます。各フィルターカードチャンバーに100マイクロリットルのFACSバッファーを追加し、スライドを短時間遠心分離します。スピンの終了時に、各チャンバーに100マイクロリットルの細胞を加え、細胞を遠心分離します。

次に、スライドをチャンバーから慎重に取り外して、空気乾燥させます。骨髄細胞を染色するには、スライドをMay-Grunwald溶液が入ったCoplinジャーに5分間浸します。次に、スライドをpH 6.8の緩衝液の瓶に1分間移します。次に、スライドをGiemsa R溶液に10分間移し、続いてpH中性の水で10秒間洗浄します。

洗浄後、スライドを自然乾燥させ、各サンプルに1滴の封入剤を塗布します。次に、カバーガラスの一方の端をスライドに置き、カバーガラスをセル上に慎重に下げ、軽く押して気泡を取り除きます。

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最終更新:15 8月 2026