マウス後肢からの骨髄採取

- 骨髄は、骨の中空の中心に存在する海綿状のゼラチン組織です。造血幹細胞が含まれており、免疫系の重要な構成要素である血液細胞を生成します。大腿骨や脛骨などの大きな骨からの骨髄分離は、高い細胞収量を提供します。

骨髄を採取するには、安楽死させたマウスを仰臥位に置き、エタノールを使用して皮膚を滅菌します。腹腔を切って皮膚を切除し、後肢を露出させます。脚の長い骨である脛骨を骨折し、生理学的状態を維持するために冷たいPBSに入れます。膝蓋骨を脱臼し、筋肉を切除して大腿骨、大腿骨を露出させます。

大腿骨を骨の底から切り取り、冷たいPBSに入れます。小容量のマイクロ遠心チューブに穴を開け、骨の開放端を穴に向けて両方の骨をその中に入れます。骨の入ったチューブを大容量のマイクロ遠心チューブに入れ、二層チューブを遠心分離して骨髄をペレット化します。採取した骨髄をさらなる分析に使用します。このプロトコルでは、マウスの後肢から骨髄を採取します。

- 骨髄採取のためには、6〜10週齢のC57 black-6マウスを滅菌外科用パッド上の仰臥位に置き、70%エタノールを使用して腹部と後肢を滅菌します。解剖用の手術用ハサミを使用して腹腔を開き、皮膚を切除して後肢を露出させます。一対の鈍い先端ドレッシング鉗子を使用して、マウスの脛骨を足首の真下に保持し、湾曲したドレッシング鉗子のペアを使用して、鈍い先端ドレッシング鉗子の下の脛骨を安定させます。

鈍い先端ドレッシング鉗子を使用して脛骨を壊し、筋肉を取り除いて骨を露出させてから、脛骨を冷たいPBSに入れます。安定化湾曲ドレッシング鉗子を大腿骨に移動し、鈍い先端ドレッシング鉗子を膝関節の下にスライドさせて膝蓋骨を保持します。ゆっくりと引き上げて膝蓋骨を脱臼させ、膝蓋骨から筋肉を取り出して大腿骨を露出させます。露出した大腿骨を湾曲した包帯鉗子で保持し、手術用ハサミを使用して骨の底から大腿骨を切り取ります。次に、大腿骨をPBSに留置します。

次に、18ゲージの針を使用して0.5ミリリットルの微量遠心チューブに穴を開け、骨の開放端を下に向けてチューブに両方の骨を穴に入れます。0.5ミリリットルのチューブを1.7ミリリットルの微量遠心チューブに入れ、微量遠心機で二層構造のチューブを回転させます。遠心分離の最後に、骨髄がチューブの底まで抽出されたことを確認します。