大腸癌のPDOXマウスモデルの生成:マウスモデルにおける大腸癌の進行の研究

濾胞性樹状細胞(FDC)は、ケモカイン、サイトカイン、および成長因子を放出する最も豊富なタイプの間質細胞であり、結腸直腸癌幹細胞と相互作用して腫瘍の成長を促進します。

FDCはまた、肺や肝臓などの臓器への結腸直腸癌の節外転移を促進します。結腸直腸癌の進行を研究するために、患者の腫瘍由来癌細胞を臓器に移植します。これは、患者由来同所異種移植片(PDOX)として知られる免疫不全マウスモデルの腫瘍組織型と一致します。

まず、麻酔をかけたマウスを解剖ボード上の仰臥位にラボテープで固定します。次に、必要な量のルシフェラーゼタグ付き結腸直腸癌細胞とFDCをチューブ内で混合します。得られた懸濁液を注射器で取ります。次に、マウスの肛門開口部を特定し、準備した結腸直腸癌ミックスを直腸の粘膜下層に注入します。

転移負荷を観察するには、毎週ルシフェリンを腹腔内に注射し、生物発光イメージングを使用してマウスを画像化します。ルシフェラーゼ酵素とATPの存在下では、がん細胞のルシフェリンはオキシルシフェリンに変換され、青緑色の光を発します。次のプロトコルでは、結腸直腸癌の進行を研究するための同所性異種移植マウスモデルを生成します。

- CRCマウスモデルを作成するには、麻酔をかけた6〜8週齢のオスのNOD SCIDマウスを解剖顕微鏡下で仰臥位にし、鼻をイソフルラン鼻コーンに固定し、前肢をテープで固定して安定性を確保します。尾の付け根の下に小さなガーゼ部分などの小さな物体を置き、肛門を持ち上げて視認性と角度を改善します。湾曲した、潤滑された、鈍い先端の鉗子を使用して、肛門管を拡張し、遠位の肛門と直腸粘膜を露出させ、糞便を取り除きます。

滅菌済みの30ゲージの取り外し可能な針を50マイクロリットルのガラスシリンジに接続します。前のステップで調製した腫瘍およびHK細胞懸濁液の10マイクロリットルをシリンジに引き込みます。10マイクロリットルを肛門管の1〜2ミリメートル上の遠位後直腸粘膜下組織に注入し、骨盤腔に入らないようにします。最後に、マウスをイソフルランノーズコーンから取り出し、苦痛の兆候がないか手順を踏んで1時間観察します。