糞便微生物DNA単離:マウス腫瘍モデルにおける環境濃縮がマイクロバイオームの多様性に及ぼす影響の研究

0 views • 3:46 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- 環境エンリッチメント(EE)とは、がんなどのさまざまな病気に有益な効果を得るための住宅パラメータの変更を指します。腫瘍担体マウスでは、EEが免疫系を活性化し、炎症を軽減し、最終的に腸内細菌叢を改善し、生存率を向上させます。腸内細菌叢の変化を研究するには、マウスの便が入ったチューブに所望の量の便溶解バッファーを追加します。

サンプルを遠心分離し、上清を新しい微量遠心チューブに移します。DNaseおよびRNaseを変性させる塩化グアニジニウム溶解バッファーを添加します。次に、エタノールを添加し、サンプルをシリカスピンカラムに移します。

エタノールはDNAがシリカに結合するのを助けます。サンプルを遠心分離します。次に、カラムを新しい微量遠心チューブに移し、カラムに溶出バッファーを添加してDNAを溶出します。

サンプルを遠心分離し、カラムを廃棄します。サンプルをPCRチューブに移し、PCRを実行してDNAを増幅します。DNAをアガロースゲルにロードし、電気泳動を行って微生物DNAのサイズを定量化します。次のプロトコルでは、便からDNAを分離して、腫瘍形成マウスの結腸微生物叢に対するEE効果を分析します。

- 市販のキットを利用して、便病原体検出プロトコルに従って便から微生物DNAを分離します。その際、マイナス80°Cの冷凍庫からサンプルをドライアイスに移し、重量を量ります。次に、テキストプロトコルに記載されているように、微生物DNAを増幅するPCRを設定します。その後、磁気ビーズを用いて反応生成物をクリーンアップします。

クリーンアップのために、まず、アンプリコンPCRプレートを短時間遠心分離して反応生成物を吸引します。次に、磁気ビーズをボルテックスして均一に分散させ、20マイクロリットルのアリコートを各反応ウェルに移します。全量をゆっくりと10回ピペッティングして、ビーズを溶液と完全に混合します。その後、ビーズを5分間落ち着かせます。

次に、PCRプレートを磁気スタンドに置き、ビーズの磁気収集後に上清が透明になるまで2分間待ちます。次に、上清を取り除いて捨てます。次に、プレートを磁石に置いたまま、ビーズの各ウェルに200マイクロリットルの新鮮な80%エタノールを入れ、30秒待ちます。次に、上澄みを慎重に取り除きます。

この洗浄手順を一度繰り返し、ビーズを10分間自然乾燥させます。次に、プレートを磁気スタンドから取り外し、各ウェルに52.5マイクロリットルのトリスを加えて、ビーズから反応生成物を溶出します。全量をゆっくりと10回ピペッティングして、ビーズを溶液に完全に混合します。次に、前回と同様に磁気スタンドにビーズを収集し、上清50マイクロリットルをきれいなPCRプレートに移します。プレートを透明な接着剤で覆い、マイナス20°Cで最大1週間保管します。

06:50

環境エンリッチメントの有効性を評価する手段として秘密箱の使用

Related Videos

0 Views

09:30

豊かな環境の住宅マウス用のプロトコル

Related Videos

0 Views

07:02

スラットフローリングに収容された豚の有意義な環境濃縮と測定唾液コルチゾールの測定

Related Videos

0 Views

09:01

生きたマウスのシリアル内視鏡イメージングを使用して、腸の異常のための新しい治療の有効性の非侵襲的評価

Related Videos

0 Views

08:14

マウスの大腸腫瘍モデルにおける結腸マイクロバイ生物多様性環境エンリッチメントの効果を定義する方法

Related Videos

0 Views

08:32

濃縮と確立された皮下マウス腫瘍における腫瘍免疫と免疫のない微小のキャラクタリゼーション

Related Videos

0 Views

11:22

2段階PCRと次世代16S rRNA遺伝子シーケンシングを用いての微生物叢解析

Related Videos

0 Views

05:28

簡単で費用対効果の高いDNA単離法を用いたループス発生マウスの糞便微生物叢動態の解析(英語)

Related Videos

0 Views

07:32

マウス糞便分離と微生物叢移植

Related Videos

0 Views

07:45

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026