自然転移マウスモデル:同所注射された結腸直腸癌細胞の転移能を研究するためのプラットフォーム

- 結腸直腸癌オルガノイドを発現する緑色蛍光タンパク質(GFP)の培養から始めます。オルガノイドを収穫します。細胞剥離酵素溶液で処理し、オルガノイドを単一細胞懸濁液に解離します。遠心分離して酵素含有上清を分離します。上清を取り除きます。GFPを発現する結腸直腸癌細胞を、人工の細胞外マトリックス含有培地を用いて再懸濁します。セル懸濁液をシリンジに装填し、氷上に保持して、周囲温度でのマトリックスの固化を防ぎます。

次に、麻酔をかけたマウスを仰臥位で準備します。肛門の開口部から直腸の粘膜層をそっと引き出します。次に、調製したGFP発現がん細胞懸濁液を、血管のネットワークを含む直腸粘膜下層に注入します。マウスが回復するのを待ちます。

数日以内に、注射部位にGFP発現原発腫瘍が発生します。自然転移では、これらの腫瘍細胞は剥離して循環に入ります。最終的に、細胞は離れた臓器に血管外漏出して増殖し、GFP陽性の転移性腫瘍を形成します。次のプロトコルでは、GFP発現結腸直腸オルガノイド細胞を同所的に注入することにより、結腸直腸癌の自然転移マウスモデルの生成を示します。

- CRC患者由来腫瘍異種移植片の自然転移マウスモデルを確立するには、示されているようにGFP標識オルガノイドを解離し、PBSの50マイクロリットルあたり5つの腫瘍細胞に5倍の10で単一腫瘍細胞懸濁液を希釈し、50%の人工細胞外マトリックス濃度を補充します。マウス1匹あたり50マイクロリットルの細胞を22ゲージの針を備えた注射器にロードし、腫瘍細胞を氷の上に置きます。

次に、つま先のつま先つまみに対する反応の欠如を確認し、最初に麻酔したNOGマウスを実験室のベンチの仰臥位に置きます。滅菌ピンセットを使用して、直腸粘膜を肛門からそっと引き出し、すぐに腫瘍細胞を直腸粘膜下組織に注入します。