実験的転移マウスモデルの確立:GFP発現CRCオルガノイド細胞をPDXモデルに移植して微小転移を検出する

- 微小転移は、原発腫瘍から排出され、血液またはリンパ節を介して体のさまざまな部分に広がるがん細胞の小さなグループです。微小転移を検出するには、結腸直腸癌オルガノイド細胞をPBSに懸濁させてpHを維持し、細胞懸濁液を注射器にロードします。次に、麻酔をかけたマウスを手術用ベッドの上で腹臥位に置きます。左脇腹下部をハサミで小さく切開し、脾臓を露出させます。ピンセットを使用して脾臓をそっと引き出し、細胞懸濁液をゆっくりと脾臓に注入します。縫合糸を使用して切開部を閉じ、動物をケージに戻します。回復するまで監視します。

所望の注射期間の後、マウスを犠牲にして原発腫瘍と異なる組織を解剖します。解剖した組織を蛍光顕微鏡で観察します。GFP発現がん細胞は、脾臓の注入部位に原発腫瘍を生じます。原発腫瘍から採取した数個のがん細胞は、別の臓器(通常は肝臓)に移動して微小転移性コロニーを形成します。以下のプロトコールでは、GFP発現結腸直腸癌オルガノイド細胞の実験的転移マウスモデルを確立します。

- CRC患者由来腫瘍異種移植片の実験的転移モデルを確立するには、単一腫瘍細胞懸濁液を50マイクロリットルの濃度あたり4倍10〜4の細胞で希釈し、マウスあたり50マイクロリットルの細胞を22ゲージ針を備えた注射器にロードします。最初に麻酔をかけたNOGマウスをベンチの腹臥位に置き、左脇腹の下部に小さな切開を行います。

滅菌ハサミとピンセットを使用して腹膜を慎重に切り取り、脾臓を露出させ、ピンセットを使用して脾臓に付着した脂肪をつかみます。その後、50マイクロリットルの腫瘍細胞懸濁液をゆっくりと脾臓に注入し、漏れが観察されないように注意します。

すべてのマウスを注射し、必要に応じて縫合した後、動物を自宅のケージに戻し、腫瘍細胞送達の1日後に縫合糸の漏出と生存率を確認します。ノギスを使用して腫瘍を毎週測定し、原発腫瘍と関連組織を適切な実験エンドポイントまで採取します。解剖した腫瘍と臓器を氷上の10cmのシャーレで5ミリリットルの氷冷PBSに移し、解剖した組織を実体蛍光顕微鏡で観察してGFP発現を評価します。