患者由来異種移植片モデリング:黒色腫マウスモデルを生成する技術

- 患者由来の異種移植片またはPDXモデルでは、ヒト患者由来の腫瘍細胞または断片が免疫不全のレシピエントマウスに移植されます。PDXモデルは、ヒト腫瘍微小環境の生物学的および分子的特性をシミュレートします。黒色腫PDXモデルを開発するには、まず、黒色腫患者から腫瘍組織を採取します。腫瘍から壊死組織を切除します。腫瘍をミンチしてスラリーを得ます。次に、麻酔をかけたレシピエントマウスを腹臥位で調製します。背側の皮膚に小さな外科的切開を行います。皮膚のすぐ下にある筋膜または緩い結合組織の層をそっと切ります。これにより、皮膚が下にある筋肉層から分離され、腫瘍移植用のポケットが作成されます。

腫瘍スラリーをポケットにそっと移します。次に、人工の細胞外マトリックスをポケットに投与して、移植された腫瘍細胞を安定させて固定します。傷口を外科的にホチキス止めし、マウスが回復するのを待ちます。レシピエントマウスを毎週モニターして、異種移植腫瘍の成長を観察します。次のプロトコルでは、患者由来の黒色腫腫瘍細胞を免疫不全の NSG マウスに皮下移植して、黒色腫患者由来の異種移植モデルを生成することを実証します。

- 外科的切除または外科的生検組織を移植するには、まず、NSGの6〜8週齢の麻酔マウスの腰から毛を剃り、約1.5センチメートルから3センチメートルの領域を毛のない状態にします。腫瘍チャンクを調製し、ペトリ皿内の腫瘍スラリーを個々のマウンドに分割して外科的移植を行います。メスの刃を使用して、マウスの背面の中央に約5ミリメートルの長さの切開を行います。1組の鉗子で、オペレーターの反対側の切開部側の皮膚を持ち上げます。一方、ハサミで、小さなハサミで筋膜を優しく切って筋肉層から皮膚を分離し、腫瘍組織用のポケットを作成します。

メスの刃を使用して、腫瘍の塊と腫瘍スラリー組織の個々の山を1つ拾い上げ、作成したポケットに組織をそっと入れます。次に、ポケットの腫瘍組織マウンドに100マイクロリットルの人工細胞外マトリックスを追加します。2対の鉗子を使用して、創傷の端が互いに接近するように両端の切開部を引き上げます。次に、1つまたは2つの傷口クリップを適用して傷口を閉じます。鎮痛剤1キログラムあたり1〜5ミリグラムを皮下注射します。治癒が完了したら、約7日後に傷口クリップを取り外します。