最小紅斑性用量アッセイ:マウスモデルにおけるUV感度の測定方法

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- メラノサイトは、有害な紫外線を吸収するユーメラニンという暗い色素を産生し、肌を保護します。UV感度を測定するには、まず麻酔をかけたマウスモデルを採取します。マウスの背側の毛皮を取り除き、表皮層を露出させてマウスを準備します。露出した皮膚に一定数の穴が開いたUVカットテープを固定します。開口部を隠すために、1つを除くすべての穴に小さな取り外し可能なテープを固定します。

次に、マウスを希望の時間UV放射にさらします。露光期間中は、所定の時点で残りの穴のマスクを順番に解除します。これにより、連続して露出した皮膚パッチが紫外線の線量を減らすのが容易になります。この穴により、紫外線がマウスの表皮に局所的に浸透します。

曝露すると、表皮細胞は炎症誘発性分子を放出します。これらの分子は真皮に向かって拡散し、真皮血管を拡張して紅斑や皮膚の発赤を引き起こします。その後、白血球は真皮に浸潤し、露出した領域に浮腫や腫れを引き起こします。

実験の終点で放射線を止め、テープをはがして紅斑と浮腫を観察します。次のプロトコルでは、フォルスコリン (メラニン産生薬) で処理されたヒト化マウス モデルで UV 感度を測定します 最小紅斑性用量を決定します。

- 最小紅斑性用量(MED)を決定するために、各動物はさまざまなUV線量にさらされます。まず、1平方センチメートルの円形の切り欠きが付いた頑丈な穴あけパンチを使用して、テープに穴を開けるUV閉塞性テープを準備します。テープの各穴に、UV露光用に取り外すことができる小さいながらも簡単に取り外し可能なテープを貼り付けます。麻酔をかけたマウスの背側表面にテープを置きます。

動物の目が開いている場合は、乾燥や紫外線への曝露による怪我を防ぐために人工涙液を塗布します。ピーク出力が313ナノメートル、範囲が280〜370ナノメートルの2つのUVBランプで構成されるUVソースをオンにします。ランプを一定のUV出力に平衡化させてから、UVBセンサー付きのUV光度計を使用して出力を確認します。

UV光度計で測定したUV透過率に基づいて、各所望の線量のUV露光時間を計算します。たとえば、ランプのUVB出力は2.4ミリワット/平方センチメートルです。したがって、1平方メートルあたり5キロジュールを投与するには、ここで計算したように、皮膚を208秒間のUVB放射線にさらす必要があります。

次に、鎮静剤を打った動物の腹面を下にして、紫外線に均一にさらされるようにします。選択した線量の放射線を投与するには、穴を覆っている小さなテープ片を適切なタイミングで順番に剥がします。

例えば、1平方メートルあたり40キロジュールが最大線量の場合、マウスは27分47秒間ランプの下にあり、この線量の穴は最初から露出します。ただし、1平方メートルあたり5キロジュールの場合、テープは残り208秒の露光時間で取り外されます。紫外線を浴びた後は、テープを慎重にはがし、動物を暖かく静かな場所に置いて麻酔から回復してからケージに戻します。

最小紅斑性用量 (MED) 値は、露出した皮膚の輪全体の紅斑および/または浮腫によって定義される炎症を引き起こす UV の最小用量に対応します。マウスを24時間から48時間観察し、紫外線に曝露した領域に紅斑または浮腫の離散領域を探します。

時々、残留する毛皮の無精ひげは、根本的な皮膚の紅斑や浮腫を隠すことにより、MEDテストの解釈を混乱させます。70%エタノールで肌を濡らすと、肌の解釈がはるかに簡単になります。皮膚の所見を写真で記録し、マウスを動物施設に戻します。

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最小紅斑量(MED)試験

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最終更新:1 8月 2026