Name: SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: 学ぶSJLマウスを用いた実験的自己免疫性下垂体炎の誘導法と組織病理学的評価手法。下垂体免疫原の投与とリンパ球浸潤の定量的解析により、ヒト疾患を模したモデル動物を作成し、自己免疫疾患の病態解明に貢献します。

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実験的なプロトコル下垂体免疫原が（関連記事参照）準備されると、それはSJLマウス（ジャクソンラボラトリーズ、株式000686）に皮下注射される。第二同一の注入は、7日後に繰り返されます。マウスは、 生体と検死結果に収集するために使用されています。 ステップ1。 SJLマウスに下垂体の免疫原を皮下注射マウスは、20 mg / mlの2,2,2 - トリブロムエタノールを0.5ml（AVERTIN、TCIアメリカ、T - 1420）を腹腔内注入による最初の麻酔です。マウスは、コンパニオンJoveの2181の記事で示したように、下垂体エマルジョン100μlを皮下注射する、下垂体抽出物と完全フロイントアジュバントの0.25ミリグラム、1ミリグラムが含まれています。エマルジョンは、左背側後肢領域（（50μL）と右鼠径部（50μL）に注入されます。下垂体エマルジョンは反対側の部位（50μlの右背側後肢の地域の中に7日目に再び注入されており、左鼠径部に50μlの）マウスは最初の3日間、毎日モニターし、初回免疫後に一般的に28日間である犠牲、の日まで、毎週されています。 ステップ2。 in vivoでの結果でのコレクション：血アッセイマウスはまだ生きている間、最も一般的に実験結果を評価するために使用される組織は、血液です。血液は、日常的に14日間下垂体抗体やサイトカインやケモカインなどの他のマーカーの血清レベルを測定するために初回免疫後に描画されます。 血液は、次のように生きたマウスから収集されます。マウスは首の首筋によって安全に保管されており、顎骨のバックが位置しています。顎骨の後部が特定されると、4mmのランセットは、ピアスに顎下維管束を使用している。血した後、血腫を避けるために、アルコール綿を使用して領域上での場所の圧力を集めている。使用されるまで、採取した血液は20分、2,000 gで遠心分離し、-80℃で保存されます。 ステップ3。事後の成果の収集：下垂体組織病理学マウスは、通常、28日初回免疫後に屠殺されています。 EAHの診断を確立するために必要な枢機卿の機能は、造血単核細胞による下垂体の浸潤である。 マウスをCO 2で潅流されているプラスチック封じチャンバ内に配置することにより安楽死されています。マウスは8分の合計のためのチャンバー内に保持されます。安楽死の後、下垂体は、関連記事で説明されているように収集されます。病気の下垂体は腫れと、よりしっかりと周囲の硬膜に付着されます。シャープ鉗子は、下垂体の周囲の髄膜を緩めるために使用されます。一度ちょう形骨上に自由に下垂体の動き、下垂体の一端を鉗子で把持され、下垂体は慎重に持ち上げられる。腺は、ベックステッドの固定液5を含むマイクロ遠心チューブに配置されます。下垂体は、一晩固定レンズの紙に包まれ、そしてカセットに配置されます。腺は、次のプロトコルを使用して処理されます。 <table border="1"><tbody><tr><td>ステーション番号</td><td>試薬</td><td>分単位の時間</td><td>温度（摂氏） </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70％アルコール</td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70％アルコール</td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95％アルコール</td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95％アルコール</td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100％アルコール</td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100％アルコール</td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100％アルコール</td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td>キシレン</td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td>キシレン</td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td>キシレン</td><tD&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td>パラフィン</td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td>パラフィン</td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td>パラフィン</td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table>処理後は、下垂体腺はパラフィンに埋め込まれているし、少なくとも5連続していないセクションは、（5 -μm厚）各腺からカットされます。切削後は、腺を、ヘマトキシリン​​およびエオシンで染色し、単核細胞浸潤を定量化するために分析されています。最も深刻な浸潤を伴うセクションがスコアリングのために選択されています。重大度は、免疫細胞による下垂体前葉の交換や破壊の程度の主観的な見積もりに基づいて採点さ：グレード0、無疾患、グレード1、2％-20％の関与、グレード2、20％-30％、グレード3、 30％〜50％、グレード4の、50％-90％、5年生、90％以上。すべてのセクションは、セクションのソースを知らされていない二人の個人によって採点されます。

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

4つの技法は、動物実験で下垂体炎を誘導することが報告されている。フロイントアジュバントと混合して下垂体蛋白質の注入であるこの記事で説明する手法は、1967年6にさかのぼる最古の一つである、そして最近では1に改善されました。他の技術は、1992年7の水溶性風疹ウイルスの糖タンパク質の注入、2002 8で下垂体に直接アデノウイルスの定位の注入、および2010年9別のラット系統の腎被膜未満のラット系統から下垂体腺の移植です。 。フロイントアジュバントアプローチの主な利点は、それが密接に人間相手に似た病気を誘発において、低侵襲、より一貫性と、上記のすべて、より正確であるということです。このビデオの記事で説明されているテクニックは、この魅惑的な病気の我々の理解を向上させるために研究者によって使用できる下垂体炎の再現可能なモデルを生み出し、。

<table><tbody><tr><td>SJLマウス (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>ストック 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-トリブロモ&amp;#8211;エタノール (アベルチン)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>Beckstead&amp;rsquo;s固定液</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sjlマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

自己免疫性下垂体炎は、感受性のマウス1内にアジュバントに混合した下垂体蛋白質の注入によって実験的に再現することができます。マウスモデルは、しばしば人間に発生する同じプロセスの正常な複製を提供し、私たちは病気の展開方法を学ぶことができます。一部の自己免疫疾患の場合は、タイプ1Aの糖尿病のように、自発的に人間のものと同様の疾患を発症モデル（NODマウス）があります。他の多くの自己免疫疾患の場合は、しかし、モデルは実験的に誘導する必要があります。この点で一般的なアプローチが検討されて臓器由来する支配的な抗原をマウスに注入することです。例えば、自己免疫性甲状腺炎に興味のある研究者は、サイログロブリン2でマウスを注入し、重症筋無力症に興味のある人は、アセチルコリン受容体3とそれらを注入する。特定の自己免疫疾患の自己抗原が知られていない場合は、捜査官は、自己免疫反応の標的臓器から粗タンパク質抽出液を注入する。自己免疫性下垂体炎の場合は、病原性の自己抗原（s）は4をまだ明らかにされないままであるため、原油下垂体タンパク質調製物が使用されます。このビデオの記事では、SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎を誘導する方法を示します。

このビデオでは、SJLマウスとどのように病理組織学的にその重症度を評価するために自己免​​疫性下垂体炎を誘導する方法を示しています。

SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

自己免疫性下垂体炎は、感受性マウスにアジュバントと混合した下垂体タンパク質を注射することで実験的に再現することができます1。マウス...

自己免疫性下垂体炎は、下垂体の腫大と1つまたは複数の下垂体ホルモンの欠乏を特徴とする。原因となる自己抗原は依然として不明である。付随するビデオでは、マウス下垂体免疫原の調製プロトコルを実演しており、これを用いてヒトの自己免疫性リンパ球性下垂体炎に類似したマウスモデルを作成する。感受性マウス系統に下垂体免疫原を注射します。その後、7日後に再度注射を行い、14日後にバイオマーカー研究のための採血を行います。28日目に、犠牲にしたマウスから下垂腺を採取して切片を作成し、染色を行うことで白血球浸潤の程度を判定します。自己免疫性下垂体炎は、鞍（sella）に生じる他の非ホルモン分泌性腫瘤との区別が困難な場合がある、近年認識が高まっている疾患です。この疾患は約50年前に初めて報告されましたが、自己免疫性下垂体炎において患者の免疫系が認識する自己抗原はこれまで不明なままでした。2008年に我々は、模倣することを目的として設計したヒトの疾患を忠実に再現するマウスモデルの開発について発表しました。このマウスモデルは、関与する下垂体自己抗原の探索や、下垂体炎の病態および自然経過についての詳細な解明に利用できます。本モデルは、SJL系統のような感受性系統にマウス下垂体タンパク質を注入することに基づいています。これらのタンパク質は、下垂体自己反応性リンパ球の出現を最終的に誘導する局所的な炎症環境を作り出すために、強力なアジュバントと混合する必要があります。まず注入部位をドレナージするリンパ節に、次いで下垂体に現れます。このモデルでは、マウス1匹あたり合計2 mgという比較的大量の下垂体タンパク質の注入が必要です。このことは、標的となる自己抗原または複数の自己抗原が下垂体内に極微量しか存在しないことを示唆しています。適切に調製したエマルションの注入は、疾患の誘導において極めて重要です。なぜなら、これにより注入部位で下垂体タンパク質が緩徐に持続的に放出され、最終的に下垂体特異的なリンパ球の生成と活性化が促進されるためです。付随するビデオでは、下垂体免疫原の調製方法を紹介しています。安楽死させたマウスから単離した下垂体をホモジナイズし、低速遠心分離によって清浄化します。得られたタンパク質混合物の量は比色法であるBCA法で評価し、品質はポリアクリルアミドゲル電気泳動によって評価します。次に、水溶性タンパク質ホモジネートを、不活化結核菌（mycobacterium tuberculosis bacilli）を含むオイルアジュバントと混合し、下垂体エマルションを作製します。付属のビデオで示された方法でエマルションを調製した後、1 mLシリンジからマイクロエマルジョン用針を取り外し、25Gの針を装着します。マウス1匹あたりの注射に必要な下垂体エマルションの量は100 µLです。Evertonでマ

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

ラットにおける養子遅延型過敏症の誘導とモニタリング

自己免疫性下垂体炎は、マウス下垂体タンパク質の抽出物を注入することにより、マウスで再現することができる。...

実験的自己免疫性下垂体炎の誘導のためのマウス下垂体免疫原の調製

このビデオは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質と不活性化結核菌の組み合わせを注入することにより、マウスモデルで実験的な自己免疫性脳脊髄炎を誘発する方法を示しています。このモデルにより、研究者は疾患のメカニズムを研究し、治療的介入をテストすることができます。...

マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

このビデオでは、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を使用して多発性硬化症のマウスモデルを確立しています。マウスにニューロンペプチドとアジュバントを含むエマルジョンを注入すると、自己反応性T細胞を活性化する免疫応答が引き起こされます。これに続いて、百日咳毒素(PTX)を注射して血液脳関門の透過性を高め、自己反応性T細胞が脳に浸潤できるようにします。この浸潤は、最終的にミエリン損傷をもたらすシグナル伝達カスケードを開始し、多発性硬化症の脱髄状態を模倣しています。...

bm12リンパ球のC57BL/6レシピエントへの移植は、全身性エリテマトーデスの確立されたモデルです。ここでは、このモデルを使用して疾患を開始する方法と、フローサイトメトリーによってT濾胞ヘルパー細胞、胚中心B細胞、および形質細胞を特徴付ける方法について説明します。...

C57BL / 6マウスにおける全身性エリテマトーデス（SLE）のBM12誘導モデル

この原稿は、実験的な自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデルの誘導と採点の方法、およびさまざまな疾患段階におけるフローサイトメトリーと定量的PCRをそれぞれ使用して、リンパ節、脾臓、血液、脊髄の免疫細胞分布とmRNAサイトカインレベルの評価を説明しています。...

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

このレポートは、Freund 完全アジュバント、百日咳毒素との組み合わせでゼロ (P0)180 199ペプチド ミエリン蛋白を用いた実験的自己免疫性炎 (EAN) を正常に誘導するために単純な方法をについて説明します。機能的障害とこの EAN...

機能と神経病理学的評価の c57bl/6 マウスの実験的自己免疫性視神経炎を誘導するための単純なアプローチ

BALB/cマウスにおけるin vivo免疫型翻訳型肝炎モデルについて、本疾患に見られる性差を含む薬剤性自己免疫性肝炎の病態解明に利用することができる。このモデルが、in vivoおよびin...

BALB/cマウスにおける薬物誘発性自己免疫性肝炎の誘導による発症機序の研究

橋本甲状腺炎のいくつかのタイプの動物モデルが確立されており、NODマウスの自然発生性自己免疫性甲状腺炎も確立されています。H-2h4マウスは、HT誘導のためのシンプルで信頼性の高いモデルです。この記事では、このアプローチについて説明し、SATマウスモデルをよりよく理解するために病理学的プロセスを評価します。...

マウス自然発症自己免疫性甲状腺炎モデルの作製

実験的自己免疫性脳脊髄炎は、多発性硬化症の最も広く使用されているマウスモデルの1つです。現在のプロトコルでは、雌雄のC57BL/6Jマウスにミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチドを免疫し、主に尾と四肢の上行麻痺を引き起こします。ここでは、EAEの誘導と評価のプロトコルについて説明します。...

両性における多発性硬化症のモデル化:MOG35-55誘発性実験的自己免疫性脳脊髄炎

ここでは、SKGマウスからのCD4+...

マウスにおける関節リウマチの養子移植モデル

学ぶSJLマウスを用いた実験的自己免疫性下垂体炎の誘導法と組織病理学的評価手法。下垂体免疫原の投与とリンパ球浸潤の定量的解析により、ヒト疾患を模したモデル動物を作成し、自己免疫疾患の病態解明に貢献します。

SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

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