Name: コールド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-02T17:30:00.000+00:00
Duration: 16 min 27 s
Description: 学ぶコールドプレコンディショニングによる神経保護メカニズムをラット海馬スライス培養を用いて解明する方法。低レベルプロ炎症性サイトカインシグナリングを測定し、麻酔や手術関連の神経損傷を防ぐ新規治療標的を特定します。

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この作品は、国立神経疾患研究所およびストローク（NS - 19108）、片頭痛研究財団、そしてリチャードP.クレイグへホワイト財団からの補助金によって賄われていた。さんマーシャP.クレイグは、培地およびスライス培養のメンテナンスの準備に協力した。我々は、この記事の最終版の彼女のコメントやリビジョンのためエレーナグリンベルクに感謝。

<ol><li>Aptowicz, C. O., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+plasticity+in+hippocampal+slice+cultures+involves+changes+in+voltage-gated+Na%2B+channel+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Homeostatic plasticity in hippocampal slice cultures involves changes in voltage-gated Na+ channel expression.</a> Brain Res. 998, 155-163 (2004).</li>
<li>Beattie, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+synaptic+strength+by+glial+TNFalpha%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Control of synaptic strength by glial TNFalpha.</a> Science. 295, 2282-2285 (2002).</li>
<li>Breder, C. D., Dewitt, D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+inducible+cyclooxygenase+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of inducible cyclooxygenase in rat brain.</a> J Comp Neurol. 355, 296-315 (1995).</li>
<li>Caggiano, A. O., Breder, C. D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+elevation+of+cyclooxygenase-2%2C+but+not+lipoxygenase%2C+in+regions+synaptically+distant+from+spreading+depression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Long-term elevation of cyclooxygenase-2, but not lipoxygenase, in regions synaptically distant from spreading depression.</a> J Comp Neurol. 376, 447-462 (1996).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eicosanoids+and+nitric+oxide+influence+induction+of+reactive+gliosis+from+spreading+depression+in+microglia+but+not+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Eicosanoids and nitric oxide influence induction of reactive gliosis from spreading depression in microglia but not astrocytes.</a> J Comp Neurol. 369, 93-108 (1996).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+and+4-aminopyridine+prevent+the+lipopolysaccharide-induced+outwardly+rectifying+potassium+current+and+interleukin-1beta+production+in+cultured+rat+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 and 4-aminopyridine prevent the lipopolysaccharide-induced outwardly rectifying potassium current and interleukin-1beta production in cultured rat microglia.</a> J Neurochem. 70, 2357-2368 (1998).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E+receptor+subtypes+in+cultured+rat+microglia+and+their+role+in+reducing+lipopolysaccharide-induced+interleukin-1beta+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E receptor subtypes in cultured rat microglia and their role in reducing lipopolysaccharide-induced interleukin-1beta production.</a> J Neurochem. 72, 565-575 (1999).</li>
<li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+therapies+for+stroke+and+traumatic+brain+injury+often+display+U-shaped+dose+responses%3A+occurrence%2C+mechanisms%2C+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Drug therapies for stroke and traumatic brain injury often display U-shaped dose responses: occurrence, mechanisms, and clinical implications.</a> Crit Rev Toxicol. 38, 557-577 (2008).</li>
<li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+stress+response+terminology%3A+Integrating+the+concepts+of+adaptive+response+and+preconditioning+stress+within+a+hormetic+dose-response+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Biological stress response terminology: Integrating the concepts of adaptive response and preconditioning stress within a hormetic dose-response framework.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 222, 122-128 (2007).</li>
<li>Calabrese, E. J., Baldwin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormesis%3A+the+dose-response+revolution%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Hormesis: the dose-response revolution.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 175-197 (2003).</li>
<li>Hansel, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+CD4%2B+T-cell+gene+expression+in+allergic+subjects+using+two+different+microarray+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Analysis of CD4+ T-cell gene expression in allergic subjects using two different microarray platforms.</a> Allergy. 63, 366-369 (2008).</li>
<li>Hulse, R. E., Kunkler, P. E., Fedynyshyn, J. P., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+multiplexed+bead-based+cytokine+immunoassays+for+rat+serum+and+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of multiplexed bead-based cytokine immunoassays for rat serum and brain tissue.</a> J Neurosci Methods. 136, 87-98 (2004).</li>
<li>Hulse, R. E., Swenson, W. G., Kunkler, P. E., White, D. M., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monomeric+IgG+is+neuroprotective+via+enhancing+microglial+recycling+endocytosis+and+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Monomeric IgG is neuroprotective via enhancing microglial recycling endocytosis and TNF-alpha.</a> J Neurosci. 28, 12199-12211 (2008).</li>
<li>Hulse, R. E., Winterfield, J., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+clasmatodendrosis+in+hippocampal+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Astrocytic clasmatodendrosis in hippocampal organ culture.</a> Glia. 33, 169-179 (2001).</li>
<li>Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-alpha+and+Microglial+Hormetic+Involvement+in+Neurological+Health+and+Migraine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dose-Respose+Society%22%5BJournal%5D)">TNF-alpha and Microglial Hormetic Involvement in Neurological Health and Migraine.</a> International Dose-Respose Society. , (2010).</li>
<li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+cytokine+protein+expression+profiles+from+spreading+depression+in+hippocampal+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Multiplexed cytokine protein expression profiles from spreading depression in hippocampal organotypic cultures.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 24, 829-839 (2004).</li>
<li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Schmitt, M. W., Nicholson, C., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+current+source+density+analysis+in+hippocampal+organotypic+culture+shows+that+spreading+depression+occurs+with+uniquely+reversing+currents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optical current source density analysis in hippocampal organotypic culture shows that spreading depression occurs with uniquely reversing currents.</a> J Neurosci. 25, 3952-3961 (2005).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytosis+from+excitotoxic+injury+in+hippocampal+organ+culture+parallels+that+seen+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytosis from excitotoxic injury in hippocampal organ culture parallels that seen in vivo.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 17, 26-43 (1997).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+waves+precede+electrophysiological+changes+of+spreading+depression+in+hippocampal+organ+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Calcium waves precede electrophysiological changes of spreading depression in hippocampal organ cultures.</a> J Neurosci. 18, 3416-3425 (1998).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P%2FQ+Ca2%2B+channel+blockade+stops+spreading+depression+and+related+pyramidal+neuronal+Ca2%2B+rise+in+hippocampal+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">P/Q Ca2+ channel blockade stops spreading depression and related pyramidal neuronal Ca2+ rise in hippocampal organ culture.</a> Hippocampus. 14, 356-367 (2004).</li>
<li>Lambertsen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+protect+neurons+against+ischemia+by+synthesis+of+tumor+necrosis+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia protect neurons against ischemia by synthesis of tumor necrosis factor.</a> J Neurosci. 29, 1319-1330 (2009).</li>
<li>Lee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormesis+and+disease+resistance%3A+activation+of+cellular+stress+response+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Hormesis and disease resistance: activation of cellular stress response pathways.</a> Hum Exp Toxicol. 27, 155-162 (2008).</li>
<li>Ning, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+and+simultaneous+gene+profiling+of+84+drug-metabolizing+genes+in+primary+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Systematic and simultaneous gene profiling of 84 drug-metabolizing genes in primary human hepatocytes.</a> J Biomol Screen. 13, 194-201 (2008).</li>
<li>Oppenheim, J., Feldman, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOppenheim%2C+J+%22in+Cytokine+Reference%22">in Cytokine Reference</a>. Oppenheim, J. J., Feldman, M. 1, Academic. New York. (2001).</li>
<li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, e45-e45 (2001).</li>
<li>Stellwagen, D., Beattie, E. C., Seo, J. Y., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+AMPA+receptor+and+GABA+receptor+trafficking+by+tumor+necrosis+factor-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of AMPA receptor and GABA receptor trafficking by tumor necrosis factor-alpha.</a> J Neurosci. 25, 3219-3228 (2005).</li>
<li>Stellwagen, D., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+scaling+mediated+by+glial+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synaptic scaling mediated by glial TNF-alpha.</a> Nature. 440, 1054-1059 (2006).</li>
<li>Streit, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+as+neuroprotective%2C+immunocompetent+cells+of+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia as neuroprotective, immunocompetent cells of the CNS.</a> Glia. 40, 133-139 (2002).</li>
<li>Wilde, G. J., Pringle, A. K., Sundstrom, L. E., Mann, D. A., Iannotti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+and+augmentation+of+ischaemia-related+neuronal+death+by+tumour+necrosis+factor-alpha+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Attenuation and augmentation of ischaemia-related neuronal death by tumour necrosis factor-alpha in vitro.</a> Eur J Neurosci. 12, 3863-3870 (2000).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

コー​​ルド - プレコンディショニング神経保護に関与サイトカインシグナル伝達系の描写に重要な二つの根本的に重要な概念は、図6と図7に示されています。最初に、サイトカインは通常の脳内シグナル伝達分子が非常に低濃度です。それにもかかわらず、生理的サイトカイン濃度の変化は、遺伝子の発現を変化させる能力（図6）の脳の構造と機能（すなわち、表現型）を変更するために計り知れない可能性を秘めている。さらに、サイトカインは、同様の効果と、単一のサイトカインが変数の効果（図7）を持つことができますを持つことが非常に冗長とその複数のサイトカインの多面的です。従って、正確に冷間前処理演算子（または他の生理的前処理の刺激）から神経保護作用のための生得的なサイトカイン拠点を確立するために、関連するシグナリング変数の複合解析を判定する必要があります。これは、多重化アッセイ戦略によって実現されます。これは、コールドプレコンディショニング神経保護のサイトカイン"署名"を設立します。 <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig6.jpg" alt="図6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図6"> 図6。脳内サイトカインのシグナル伝達のパワー。イラストは他のよく知ら対応の濃度に比べて脳のサイトカインの生理的濃度の巨大なシグナル伝達力を伝える。濃度は、基準点として、単一の猫のひげをはじめ、距離の逆数として表されます。ナトリウム（コショウの粒で示される10 -1 M）およびカリウム（トマトで示される10 -3 M）は、内の役割はそれぞれ約150及び3mMの、のレベルで間質脳空間に存在し、十分に認識している神経細胞の電気生理学的機能。同様に、pH（すなわち、〜10 -7 Mの水素イオンの濃度とシカゴの湖畔に沿って780メートルとして図示）とカルシウム（すなわち、7.8キロマコーミックからシカゴの湖畔に沿って衛星Googleの画像から見て示すように、〜10 -8 Mの濃度）シカゴ大学の近くにハイドパークでのプロモントリーポイントに置きます。さらに、これらの濃度以上の間隙に放出された神経伝達物質は、局所脳領域の活性に影響を与える。対照的に、サイトカインは、（地球から火星までの距離として示されている）十数万倍未満の濃度で脳の機能を変更することができます。 <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig7.jpg" alt="図7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図7"> 図7。生得的なサイトカイン経路のインタラクティブなシグナリング。サイトカインは、非常に冗長とその複数のサイトカインの多面的なものは、同様の効果を持つことができ、単一のサイトカインは、変数の効果を持つことができます。そのような多様性は、リガンド、受容体、およびリン酸化のレベルで発生する複雑な対話型のシグナリングに由来する。さらに複雑さは、セル固有の生得的なサイトカイン、受容体、および関連するリン酸化タンパク質の変化の各能力で、脳が別の細胞型から構成されているという事実から生じている。ここに例示を目的として、唯一の生得的なサイトカインシグナル伝達経路は、（免疫細胞の研究から派生）が表示されます。単純にするために、脳は生得的なサイトカインの潜在的な相互作用を示す単セル（白い線）（（IL -1α/βとしてここに呼ばれる）、IL -1αおよびIL -1β、TNF -α、IL - 6、として描かれているIFN -γとIL - 10）、受容体（IL - 1R1、TNFR1、IL-6/gp130、IFNγR、およびIL - 10R）、およびリン酸化タンパク質（すなわち、キナーゼERK1 / 2、P38（P38 - MAPK）やJNK）と転写因子（ATF - 2、NFκB、およびSTAT3）。 TNFR1を介したATF - 2を介して遺伝子発現を誘発するJNK、p38の- MAPKおよびERK1 / 2、に例えば、TNF -αシグナル。 TNF -αはまた、NFκB活性化を介して直接遺伝子発現を変化させる。示されるように一緒に、これらの転写因子の活性化は、サイトカインとその受容体の増加（矢印）と減少した（平滑末端）式を呼び起こす。重要なことは、これらの経路は、他の（例えば、IL -1β）サイトカインの一つサイトカインの変化（例えば、TNF -α）の影響の生産を示している。従って、正確に確立するために関連するシグナリング変数の冷間前処理演算子、複合解​​析から神経保護のためのサイトカインの塩基は決定されなければならない。これは、コールドプレコンディショニングの生得的なサイトカイン"署名"を設立します。 （画像を参照＃25のデータから、コンパイルされています。）

スライス培養の準備<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> Millicell - CM組織培養インサート（30 mm）の</td><td>サーモフィッシャー</td><td> PICM0 - 3050 </td><td></td></tr><tr><td>基礎培地イーグル</td><td>インビトロジェン</td><td> 21010 </td><td></td></tr><tr><td>アールの平衡塩類溶液</td><td>シグマ</td><td> E2888 </td><td></td></tr><tr><td>馬血清</td><td>インビトロジェン</td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td>グルタミン</td><td>インビトロジェン</td><td> 35050 </td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td>インビトロジェン</td><td> 15710-064 </td><td></td></tr><tr><td> Fungizone </td><td>インビトロジェン</td><td> 15295 </td><td></td></tr><tr><td> D -グルコース</td><td>シグマ</td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> BSL - 1ヒュームフード</td><td>ベイカー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マッキルウェーン組織チョッパー</td><td>ブリンクマン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>テフロンディスク</td><td>ブリンクマン</td><td> 023-49-310-1 </td><td></td></tr><tr><td>へら</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 14から373 - 25A </td><td></td></tr><tr><td>湾曲した虹彩鋏</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 14091〜09 </td><td></td></tr><tr><td>ロングストレートはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 14002〜14 </td><td></td></tr><tr><td>長い鉗子</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 13-812-40 </td><td></td></tr><tr><td>角度付き鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11808〜02 </td><td></td></tr><tr><td>ショート鉗子</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 13-812-38 </td><td></td></tr><tr><td> ＃5イノックス鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11254〜20 </td><td></td></tr><tr><td> 2アイリスspatulae </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10094〜13 </td><td></td></tr><tr><td> 150 × 15ミリメートルのペトリ皿</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 08-757-148 </td><td></td></tr><tr><td> 60 × 15ミリメートルのペトリ皿</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 08から757 - 100B </td><td></td></tr><tr><td>ワイルドM8実体顕微鏡</td><td>ワイルドHeerbrugg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Geyのバランス塩溶液</td><td>シグマ</td><td> G9779 </td><td></td></tr><tr><td> Blak - Rayの短波長紫外線測定メーター</td><td> UVP </td><td> J - 225 </td><td></td></tr><tr><td> 6ウェルファルコン培養ディッシュ</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 08から772 - 1B </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td>インビトロジェン</td><td> 21103</td><td></td></tr><tr><td> B27サプリメント</td><td>インビトロジェン</td><td> 17504 </td><td></td></tr><tr><td> Gem21 Neuroplex </td><td>ジェミニのバイオ製品</td><td> 400-160-010 </td><td></td></tr><tr><td>アスコルビン酸</td><td>シグマ</td><td> A4544 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2アナライザー</td><td>バカラック</td><td> ＃2820 </td><td></td></tr></tbody></table>スライス培養のバイタリティでの事前スクリーニング<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> SYTOXグリーン</td><td>インビトロジェン</td><td> S7020 </td><td></td></tr><tr><td> DMIBRE倒立顕微鏡</td><td>ライカ</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>冷間前処理<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> BSL - 2の換気フード</td><td> NuAire </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>興奮毒性損傷<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> CoolSnap FX CCDカメラ</td><td> Photometrics </td><td></td><td></td></tr><tr><td>フルオレセイン</td><td>インビトロジェン</td><td> F36915 </td><td></td></tr><tr><td> MetaMorphソフトウェア</td><td>分子デバイス</td><td> V. 7.5.04 </td><td></td></tr><tr><td> 100μmの深さ血球計</td><td> Hausserサイエンティフィック</td><td></td><td></td></tr><tr><td> N -メチル- D -アスパラギン酸</td><td>カルビオケム</td><td> 454575 </td><td></td></tr><tr><td> SigmaStatソフトウェア</td><td> SYSTATソフトウェア株式会社</td><td> V. 3.5 </td><td></td></tr></tbody></table>コー​​ルド - プレコンディショニングを適用した共同治療<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> sTNFR1 </td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 425 - R1 - 050 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>シグマ</td><td> - 4503 </td><td></td></tr></tbody></table> RNA分離<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> RNAl ater </td><td>アンビオン</td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロRNeasyキット</td><td>キアゲン</td><td> 74004 </td><td></td></tr><tr><td> β-メルカプトエタノール</td><td>フィッシャー</td><td> 03446-100 </td><td></td></tr><tr><td> Diposable 1.5 RNaseフリーの杵</td><td>サウスジャージーの精密工具や金型、（株） </td><td> 749521-1590 </td><td></td></tr><tr><td> RNasin </td><td>プロメガ</td><td> N261A </td><td></td></tr><tr><td>トリス[ヒドロキシメチル]アミノメタン</td><td>シグマ</td><td> T3069 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA（エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩水和物</td><td>シグマ</td><td> ＃E7889 </td><td></td></tr></tbody></table> RNAの定量<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> RiboGreenアッセイ</td><td>インビトロジェン</td><td> R11491 </td><td></td></tr><tr><td>酵母tRNA </td><td>インビトロジェン</td><td> 15401-011 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5mLの遠心チューブ</td><td>米国サイエンティフィック</td><td> 16155500 </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェル蛍光アッセイプレート</td><td>ヌンク</td><td> DK - 4000 </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェル蛍光プレートリーダー</td><td>テカン</td><td>サファイアII </td><td></td></tr></tbody></table>定量PCR <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> iScript逆転写キット</td><td> Bio - Rad社</td><td> 170-8891 </td><td></td></tr><tr><td> SYBRグリーン</td><td>インビトロジェン</td><td> S7563 </td><td></td></tr><tr><td>プラチナTaqポリメラーゼ</td><td>インビトロジェン</td><td> RNA Ultrasense 11732-927 </td><td></td></tr><tr><td> iCyclerサーマルサイクラー</td><td> Bio - Rad社</td><td> iCycler光モジュール</td><td></td></tr><tr><td> iCyclerのシステムソフトウェア</td><td> Bio - Rad社</td><td> V. 3.1 </td><td></td></tr></tbody></table>マイクロアレイのための定量PCR <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> アウェイ RNaseの</td><td>分子バイオ製品</td><td> ＃7000 </td><td></td></tr><tr><td> RT 2最初ストランドキット</td><td> SABiosciences </td><td> C - 03 </td><td></td></tr><tr><td> SYBRグリーンベースのPCRミックス</td><td> SABiosciences </td><td> PA - 011 </td><td> iCyclerのための特定の</td></tr><tr><td> RT 2 ProfilerのPCRアレイ</td><td> SABiosciences </td><td> PARN - 011A </td><td></td></tr></tbody></table>プロテオミクスアッセイ<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号</td><td> コメント </td></tr><tr><td>細胞溶解キット</td><td> Bio - Rad社</td><td> 171-304011 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心機</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>マイクロ7 </td><td></td></tr><tr><td> BSAタンパク質の株式</td><td> Bio - Rad社</td><td> 500-0007 </td><td></td></tr><tr><td> BCAタンパク質アッセイキット</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td> 23225 </td><td></td></tr><tr><td>免疫96マイクロウェルプレート</td><td>ヌンク</td><td> 449824 </td><td></td></tr><tr><td>ガムテープ</td><td> Bio - Rad社</td><td> 2239444 </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェルプレートリーダー</td><td>パーキンエルマー</td><td> 1420 - mulilabelカウンタ</td><td></td></tr><tr><td> BioplexラットTNF -αのサイトカインアッセイ</td><td> Bio - Rad社</td><td> X0000001T </td><td></td></tr></tbody></table>免疫染色<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 16％パラホルムアルデヒド</td><td>アルファAesar </td><td> 43368 </td><td></td></tr><tr><td>リジン</td><td>シグマ</td><td> L - 6001 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> S374 - 1 </td><td></td></tr><tr><td>ヨウ素酸ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S - 1878 </td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S - 2002 </td><td></td></tr><tr><td>過酸化水素（30％） </td><td>シグマ</td><td> H1009 </td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>コロラド血清会社</td><td> CS 0920 </td><td></td></tr><tr><td>トリトンX - 100 </td><td>シグマ</td><td> T - 8787 </td><td></td></tr><tr><td>染色皿</td><td>テッドペラ、（株） </td><td> 14511 </td><td></td></tr><tr><td>プレートシェーカー</td><td>ラボラインインスツルメンツ株式会社</td><td> 3520 </td><td></td></tr><tr><td> ＃1フィルタペーパー（185ミリメートル） </td><td>ワットマン紙</td><td> 1001-185 </td><td></td></tr><tr><td> 3,3 - ジアミノベンジジン</td><td>シグマ</td><td> D8001 </td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド</td><td>シグマ</td><td> D8418 </td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td> Pharmco - AAPER </td><td> 111000200 </td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> X3S - 4 </td><td></td></tr><tr><td> Permountマウントメディア</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> SP15 - 100 </td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット</td><td>ライカ</td><td> cm 3の 050 S </td><td></td></tr><tr><td>組織 - Tek社</td><td>テッドペラ、（株） </td><td> 2705​​0 </td><td></td></tr><tr><td>精密チップペイントブラシ</td><td>テッドペラ</td><td> 11806 </td><td></td></tr><tr><td> PAPブロッキングペン</td><td>テッドペラ、（株） </td><td> 22309 </td><td></td></tr><tr><td> SFXシグナルエンハンサー</td><td>インビトロジェン</td><td> A31631 </td><td></td></tr><tr><td>退色を延長</td><td>インビトロジェン</td><td> P7481 </td><td></td></tr></tbody></table>

コー​​ルド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning

神経損傷は、全身麻酔と、効果的な管理が容易で安全なプレコンディショニング治療法の開発により軽減することができる関連する外科的処置の罹患率と死亡率の原因となることが多い。我々は、傷害の発症前に脳を保護するための治療薬の開発のための新たなターゲットを特定する手段として、コールドプレコンディショニングを担当し神経免疫シグナルを定義しようとしています。時間の経過に伴う変化をシグナリング低レベルのプロ炎症性メディエーターは、冷間プレコンディショニング神経保護のために不可欠です。このシグナリングは、刺激性の刺激が明らかになることを保護するための刺激に適応するための十分な時間と閾値の大きさに達することを必要と生理的なコンディショニングのホルミシスの基本的な教義と一致しています。 従って、冷間プレコンディショニング神経保護に関与する免疫シグナルの線引きは、生物学的システムと実験操作に加え、技術的能力が高い再現性と小文字を区別することが必要です。我々のアプローチは密接に成熟しており、静止大膠細胞/ミクログリアの影響を受けた多シナプスニューラルネットワークによる生体のカウンターでを反映するin vitroモデルとしての海馬のスライス培養を使用することです。彼らはフェムトモル範囲の手術であるサイトカイン、の主要な供給源であるため、このグリア状態では、ミクログリアのために特に重要です。また、スライス培養、活性化刺激を呼び起こすと適応応答を評価するために十分な時間である、数週間のためにin vitroで維持することができます。最後に、環境条件を正確にそのサイトカインがコールドプレコンディショニングのシグナリングようにスライス培養を用いて制御することができるが、測定模倣、および重要なノードの側面を分析するように変調することができます。サイトカインシグナル伝達系の解析では、高感度で再現性の多重化技術を使用する必要があります。我々は、組織全体のサイトカインの変化を評価する定量的リアルタイム定量PCRアレイのスクリーニングに続いてミクログリアの活性化のために画面にTNF -αのために定量PCRを使用してください。後者は、同時に変更を通知する複数のサイトカインのシステムを測定する最も高感度で再現性の手段です。重要な変更は、対象となる定量PCRしてから、蛋白質の検出により確認されています。我々はLuminexの技術を使用して多重化ミクロスフェアのフローサイトメトリーアッセイを用いて組織ベースのサイトカインタンパク質の変化を探る。細胞特異的サイトカイン産生は、二重ラベルの免疫組織化学で決定されます。一緒になって、提案された調査の戦略に結合この脳組織の調製および使用のスタイルは、、コールドプレコンディショニングの利点を模倣することができる新たな治療法の開発のための潜在的なターゲットを特定するための最適なアプローチかもしれない。

我々は、傷害の発症前に脳を保護するための治療薬の開発のための新たなターゲットを特定する手段として、コールドプレコンディショニングを担当し神経免疫シグナルを定義しようとしています。我々は生物学的システム、実験操作に加え、再現性の高いと小文字が区別される技術的能力を必要とするような作業のための戦略を提示する。

神経学的損傷は、全身麻酔および関連する外科的手術に伴う罹患および死亡の頻繁な原因となっており、これは…によって軽減できる可能性があります。

神経学的損傷は、全身麻酔による罹患および死亡の頻繁な原因となります。本ビデオで提示する研究の目的は、損傷発生前に脳を保護するための新たな治療標的を特定する手段として、ラットの神経免疫シグナル伝達に対する寒冷プレコンディショニングの影響を検討することです。これは、健康的で長寿命な成体ラット海馬スライス培養作製することによって達成されます。免疫ベースの神経保護を誘導するために、培養組織を寒冷プレコンディショニングにさらします。その後、anci toxinを添加し、スライス培養をイメージングします。画像解析の結果、寒冷プレコンディショニングによって選択的な神経細胞脱落のレベルが劇的に減少することが示唆されます。私はリチャード・クレイグです。そしてこちらはハイディ・ミッチェルです。私たちはシカゴ大学神経科の所属です。本日は、脳疾患に対する耐性を高める手段として、低レベルの前炎症性免疫シグナル伝達を伴う神経保護に関する疑問を解決するために、スライス培養調製法をどのように活用できるかについて説明します。一般的に、この手順に不慣れな方は、長期的な生存率を確保し、低レベルの前炎症性シグナル伝達を示すことができる健全な培養状態を維持する必要があるため、苦労されることが多いです。これからハイディが、脳内の神経保護剤を開発するために、低レベルの炎症性シグナルを測定するための障壁を克服する、当研究室で用いている一連の手順を実演します。以下の実験は、清潔な白衣を着用し、白衣の袖の上に滅菌手袋を被った状態で行ってください。まず、McIlwaine組織チョッパー、専用のテフロン製インサート、カミソリの刃、手術器具、および解剖用シャーレを含む、手順に必要なすべてのアイテムをBSL-1レベルの層流クリーンベンチ内に配置することから始めてください。フードは、HIPAAフィルターを備えた陽圧培養室に設置し、実験開始の少なくとも30分前に、独立型の紫外線ライト空気浄化ファンで空気を浄化しておく必要があります。フード内に解剖用冷却プレートを設置し、細胞培養フード内の近くにあるウォーターバスに接続します。6ウェルプレートの各ウェルにミリセルインサートを配置し、それぞれに1.1 millilitersの培養液を加えます。トレイを36 °C、5% carbon dioxide、95% 湿度のインキュベーターに少なくとも20分間置きます。ラットの幼仔は、使用するまでヒートランプの下に置いて保温してください。幼仔を100% carbon dioxideの中に置いて麻酔をかけます。麻酔後、幼仔を100% ethanolに浸し、その後斬首して、胴体を1つの100 millimeter Petri dishに、頭部を別のPetri dishに入れます。次に、曲がった虹彩剪刀を用いて、正中線に切開を加え、続いて眼球の後方の左右に2か所の側方切開を行い、頭蓋骨を開けます。角度付きピンセットで頭蓋骨を剥がし、スパチュラで脳をかき出し始めます。スパチュラで三叉神経を切断して脳を取り出し、グルコースを添加した10 mLの滅菌済み冷製ハンクス平衡塩溶液を含む60 mmペトリ皿の下半分に脳を移します。次に、2番のアイリススパチュラの下で5番のIOxピンセットを使用し、各半球から海馬を切り出し、McIlwainチョッパー用のテフロンディスク上に配置します。スパチュラを用いて、脳組織から培地を遠ざけ、セクション厚を350から400 micrometersに設定したチョッパーで切断します。1 milliliterのperpetを用いて、海馬を長軸に垂直に迅速に切片化します。新鮮な切片をテフロンインサートから洗浄し、冷たいgaze BSSを入れた60 mmのペトリ皿の上半分に移します。切片を実体顕微鏡下で観察し、歯状回と傍中心細胞層が維持されている切片を特定します。次に、最も大きい3枚の切片をインサートにそっと置き、1つのポップあたり計12枚の切片を準備します。インサートを6ウェルプレートに入れ、36 °Cで3〜4日ごとにインキュベートします。古い培地を温めた新鮮な培地に交換し、増殖培地を更新してください。7日後、細胞を36°Cのインキュベーターに戻します。培地を1.1 mLのサプリメント添加無血清NeuroBasal培地に交換します。18日目に、スライス培養の生存率を確認します。まず、6ウェル培養ディッシュにox poelを1.1 millilitersずつ分注します。ディッシュをインキュベーターに入れ、36 degrees Celsiusまで温めておきます。その間に、顕微鏡用のfitzyフィルターを備えた蛍光光源を点灯させ、少なくとも20分間ウォームアップさせます。これにより、光強度が均一になります。次に、ピンセットを使用して、スライス培養インサートを培地に入れ、10分間静置します。その後、SIM不含培地に戻します。培養インサートを顕微鏡ステージに設置し、不可逆的なCA1傍辺縁層（parametal layer）の損傷をスクリーニングするための方向をマークします。培養物を倒立顕微鏡の無菌的な表面に置き、5倍の倍率で、プレスクリーニングで使用したものと同様の方向でスライスを維持して観察します。FIT CXサイトクローマイションキューブに切り替えます。寒冷プレコンディショニング用として、ca 1領域内のcytx陽性細胞数が30個未満の培養物を選択します。6ウェル培養皿に1.1 millilitersの無血清培地を分注し、培地を平衡化させるため、5%carbon dioxide、95%湿度の30 degreeインキュベーターに少なくとも20分間置きます。20分が経過した後、次へ進みます。インキュベーターから平衡化用培地を取り出します。切片が入ったカルチャーインサートを、通常の中血清不含培地から30°Cの培地に移します。その後、インキュベーションに従い、30°Cのインキュベーターに90分間置きます。スライス培養物を通常の無血清培地に戻し、36℃で24時間インキュベートします。培養インサートをcyt培地に20分間移して、スライス培養物の実験使用に向けた事前スクリーニングを開始します。スライスをインキュベートしている間に、紫外線ランプとCCDカメラの電源を入れ、20分間ウォームアップさせます。必要に応じて、ソフトウェアを使用してCCDを50サイクル光に曝露させ、クリアにします。次に、PBS 90 µLにフルオレセイン 10 µLを溶解した溶液を、深さ100 µmのヘモサイトメーターにピペットで滴下し、顕微鏡ステージに設置します。ソフトウェアを使用して、ダイナミックレンジが4,096段階中1,000になるように露光時間を調整してください。次に、低温前処理を施したスライス培養を入れたディッシュを顕微鏡にセットし、画像を撮影します。これらの画像は背景蛍光レベルの決定に使用し、損傷したスライスから放出される蛍光からこの値を差し引きます。もし低温前処理自体が損傷を引き起こしていた場合は、次いで蛍光強度が上昇した損傷細胞が観察されます。ExoToxic傷害の影響を調べるため、少なくとも20分間36°Cに温めておいた、20〜50 µMのNMDAを含む無血清培地へインサートを移します。36°Cで60分間インキュベートします。NMDAは、インキュベーション後に神経伝達物質であるグルタミン酸の効果を模倣します。各インサートを3つの独立した60 mmディッシュに3回ずつ浸し、インサートからNMDAを洗い流してください。それぞれに36°Cに加温したニューロ basal Mediumを10 millilitersずつ含ませます。360 millimeterの洗浄用ディッシュ1枚につき、インサートを3つを超えて使用しないでください。洗浄後、インサートを新鮮な培地が入ったトレイに入れ、36°Cのインキュベーターに戻します。24時間後、前述と同様にフルオレセイン標準試料を用いてカメラの校正を行います。次に、画像を撮影する20分前に、培養物をOX培地に入れます。損傷後1日で損傷レベルが低い場合は、metamorphソフトウェアを用いて損傷を定量化するため、必要に応じて実験期間を2〜3日に延長してください。損傷部位の強度を測定するため、CA1領域の周囲に関心領域（ROI）を設定します。損傷部位の関心領域をコピーし、背景画像に貼り付けます。次に、統計ソフトを用いて、損傷部位と背景からの値をExcelに入力します。コントロール群および冷前処理済み培養物の数値からバックグラウンドを差し引いて定量し、適切な統計検定を行って、実験群とコントロール群（各実験ランに必ず含める必要があります）の損傷を比較します。この画像は、in vitroで21日間培養した典型的な成熟海馬スライス培養の染色の様子を示しています。緑色で示されているNeuN標識は、主要ニューロンの細胞構築を明らかにするために用いられています。海馬のCA1領域およびCA3領域の錐体ニューロンと、こちら左側に見える歯状回（DG）ニューロンが示されています。高倍率で示したCA1領域では、静止期マイクログリアの分枝状の形態がわかります。成熟したスライス培養において、細胞はマイクログリア表面マーカーであるCD 11 Bで標識されました。この図は、死細胞用のcytx greenマーカーでインキュベートした海馬スライス培養における、寒冷プレコンディショニングと神経保護の効果を示しています。左側のプレスクリーニング画像では、ここではCA1損傷は見られません。上段にシャム対照培養、下段に寒冷プレコンディショニング培養を示しています。中段の画像は、20 micromolar NMDAに曝露して24時間後のスライス培養における相対的な損傷を示しています。偽対照群（sham control）の傷害は、cpと表記された低温プレコンディショニングにさらされた培養細胞の傷害よりも大きいことに注目してください。相対的な傷害のカラーキャリブレーションスケールは、左上の画像に示されています。従来、その後、培養細胞を20 micromolarのMDAに一晩さらすなどして最大レベルの傷害を与え、CA1ニューロンの傷害レベルを最大化させ、偽対照群に対する低温プレコンディショニングの相対的傷害を、最大傷害に対する傷害の比率として算出します。しかしながら、最大損傷刺激への曝露だけでは、プレコンディショニングによる神経保護作用を克服するのに十分ではない可能性があります。したがって、損傷と最大損傷の比率を用いた評価では、プレコンディショニングによる神経保護を正確に反映できない場合があります。これは、右手の画像において、冷作動プレコンディショニングの最大レベルがシャム対照群よりも低くなっていることから明らかです。本研究では、損傷/最大損傷比を用いることで、冷前処置による神経保護作用が見えにくくなる可能性があることが分かりました。これは、NMDA曝露の1日後の模式図から確認でき、偽手術群（赤色）の損傷レベルが5であったのに対し、冷前処置群（青色）の損傷レベルは3であったことが示されています。これは40%の神経保護作用と一致しています。しかしながら、損傷レベルを最大損傷レベルで割るなどの従来の比率形式を用いた場合、保護効果は認められません。言い換えれば、擬似操作群で50%、寒冷プレコンディショニング群で50%となります。ここでは、mRNAサンプルを用いて定量PCRを行った結果を示します。青線で示される冷刺激プレコンディショニング後のTNF alphaレベルは、緑、黄、および紫の線で示されるコントロール群よりも高くなっていました。これは、冷刺激プレコンディショニングが脳内でのTNF alpha産生の増加を誘発することを示唆しています。定量PCRおよび定量PCRアレイの結果を確認するため、免疫染色を実施しました。このスライス培養において、赤色でインターロイキン11を、緑色でニューロンを示すA new endをそれぞれ処理しました。矢印で示されたいくつかの傍心室ニューロンが、インターロイキン11およびニューエンドの染色を示し、黄色で表示されていることに注目してください。矢印は、アストロサイトであると推定され、インターロイキン11染色の増加のみを示すいくつかのより小さな細胞を指しています。低温プレコンディショニングによる神経保護に関与するサイトカインシグナル伝達系を記述するにあたり、いくつかの根本的に重要な概念に留意することが重要です。正常な脳内ではサイトカインの濃度は極めて低いものの、サイトカイン濃度のわずかな変化が遺伝子発現を変化させます。したがって、低濃度であっても、サイトカインは脳の構造と機能を、ひいては個体の表現型を変化させる多大な潜在能力を持っています。この概念を、猫のひげを基準点とし、ナトリウム、カリウム、pH、カルシウムをTNF alphaと比較した距離の逆数として、本稿で示します。また、サイトカインは高度に冗長であり多面的な作用を持つため、複数のサイトカインが同様の効果をもたらすことがあり、また単一のサイトカインが多様な効果を及ぼす可能性があることに留意することが重要です。したがって、寒冷プレコンディショニングによる神経保護の自然免疫サイトカイン基盤を正確に確立するには、関連するシグナリング変数の複合的な解析を行う必要があります。これはマルチプレックスアッセイ戦略を通じて達成され、これにより寒冷プレコンディショニングによる神経保護のサイトカインシグネチャーが確立されます。一度習得すれば、これらの培養は約3時間で準備でき、研究のための操作を行うことが可能です。寒冷プレコンディショニングの反応は、これらの手順を実施しながら約3日間かけて行うことができます。これらの手順の後、低レベルの前炎症性シグナルを検出する能力を維持するためには、無菌操作を行い、ハンドリングを最小限に抑えることが不可欠であることを忘れないでください。寒冷プレコンディショニングが脳に対して栄養的および保護的な効果をもたらすメカニズムを解明するために、プロテオミクスや分子生物学的解析などの他の手法を培養細胞に適用することが可能です。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

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学ぶコールドプレコンディショニングによる神経保護メカニズムをラット海馬スライス培養を用いて解明する方法。低レベルプロ炎症性サイトカインシグナリングを測定し、麻酔や手術関連の神経損傷を防ぐ新規治療標的を特定します。

コー​​ルド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

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