コロンは（CASP）腹膜炎ステントAscendens - 複数菌腹部敗血症のための標準モデルを

本手順の全体的な目的は、マウスの上行結腸にステントを挿入することにより腹腔内敗血症を誘発することです。まず上行結腸を処置し、次に適合させたカニューレを結腸に挿入して固定することでこれを達成します。

最後に、ステントを取り除き、結腸を腹腔内に戻します。最終的に、血漿中のサイトカイン量および細菌数を測定することで、敗血症を示す結果を得ることができます。結紮や穿刺といった既存の手法に対する本手法の主な利点は、挿入するステントのサイズによって、敗血症の程度と死亡率を調整できることです。

一般的に、この手法に不慣れな方は、マイクロサージェリー技術にある程度の習熟が必要なため、苦労することがあります。完璧に遂行できるようになるまで練習を重ねてください。まず、麻酔薬を腹腔内投与してマウスを麻酔し、動物を仰臥位に置きます。手術中に動物の姿勢を安定させるため、マウスの足をテープでプレートに固定する必要があります。

本手順では、ヒトの静脈注射に一般的に使用されるIVカニューレを調整し、そのプラスチックチューブを削ります。マウスの腹部皮膚を十分に消毒した後、正中線に沿って先端から約15mmの範囲で切開します。白線に沿って腹筋と腹膜を切開し、腹腔を開きます。

盲腸の極を特定し、綿棒を用いて盲腸、末端回腸、および上行結腸を腹腔外へ慎重に牽引します。回盲弁から遠位に15 millimetersの位置で、7-0縫合糸を用いて上行結腸の壁を貫通させます。2回の外科的結紮により、縫合糸を結腸壁に固定します。

準備したカニューレで上行結腸を穿刺します。7-0縫合糸から近位に1〜2 mmの位置です。溝に達し、プラスチックチューブが結腸の表面と水平になるまで、慎重にカニューレを結腸内に挿入してください。

7-0縫合糸の自由端をカニューレに回し、プラスチックチューブに用意した溝の中に正確に二重結びを作ります。7-0縫合糸の針を取り、結腸の腸間膜対側壁を連続的に縫合します。さらに2つの外科的結びを行い、プラスチックチューブと結腸壁を固定します。

縫合糸の端を切断します。カニューレの金属部分を少し引き戻し、固定用の7.0縫合糸の近くでプラスチックチューブを切断します。次に、綿棒を用いて、便の先端がステントの上に少し現れるまで、盲腸から結腸ステントに向かって注意深く便を押し出します。

腸管を腹腔内に戻し、生理食塩水 0.5 milliliters を腹腔内投与して輸液蘇生を行う。腹膜を連続縫合で閉じる。疼痛緩和のため、皮膚を単結節縫合で閉じる。

必要に応じて、ブプレノルフィンなどの強力な鎮痛剤を皮下投与し、動物を餌と水が入ったケージに戻します。caspの5時間後に、マウスを再度準備して麻酔をかけ、動物に外科的処置を行います。腹壁の縫合線を切開します。

ステントが挿入された上行結腸を慎重に牽引し、ステントを固定している縫合糸を切断してステントを除去します。結腸の欠損部を単一の内反縫合で閉鎖します。腸管を腹腔内に戻し、ラダーを5 mLの生理食塩水で2回洗浄します。

腹膜を連続縫合で閉鎖します。鎮痛のため、皮膚を単結節縫合で閉鎖します。強力な鎮痛剤を定期的に皮下投与してください。

手術後2日以内に、十分な餌と水を与えて動物をケージに戻します。CASP手術後数時間は6時間ごとに動物を観察してください。動物に敗血症の初期臨床症状が現れます。CASP手術後の生存率は、挿入したステントの径に依存します。14ゲージのCASPでは死亡率100%、16ゲージのCASPでは死亡率70%、18ゲージのCASPでは死亡率50%となります。

Sham CASPでは生存率100%となります。CASPの結果は、経過時間に依存します。CASP後、ステントを留置してから3時間後に介入して除去した場合、生存率は45%となります。ステント除去をCASPから5時間後に行った場合、処置後の生存率はわずか10%にとどまります。9時間後にステントを除去すると、死亡率は100%となります。Sham CASPでは生存率100%となります。

CSPの24時間後に腹腔部位を肉眼的に観察すると、腹膜炎、浮腫、血管拡張、充血、腸壁の境界明瞭な炎症斑、腸管麻痺、遊離液、および敗血性分泌物という典型的な徴候が認められます。全身感染は、CSPの12時間後の細菌学的解析によって確認できます。腹腔洗浄液、血液、肝臓、肺、脾臓、および腎臓から大量の細菌が検出されます。

CSP誘発性敗血症では、局所的および全身的な炎症性および抗炎症性サイトカイン、ならびにケモカインの放出が起こります。CSP後12時間で、血液中だけでなく、肝臓、肺、脾臓、腎臓などの臓器懸濁液の上清中においても、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1などの相当量がELISA法で測定可能です。この手法を習得し、適切に実施すれば、10分で完了させることができます。

このビデオを視聴することで、SSPモデルおよび介入を伴うSSPモデルを用いて腹腔内敗血症を誘発する方法について十分に理解できたはずです。以上です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。