Name: 膜電位、シナプス応答、神経回路、ニューロモデュレーションとザリガニを使用して筋肉の組織学：学生研究室の演習 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 16 s
Description: 学ぶザリガニを用いた膜電位とシナプス伝達の電気生理学的手法。細胞外カリウム濃度変化による静止膜電位の測定と神経筋接合部の応答記録により、興奮性膜の特性とイオン基盤を理解する教育的研究手法を習得できる。

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膜電位 1902年には早くも、バーンスタインは、イカの軸索の静止電位の問題を扱っていた。それは、バーンスタイン（1902）とネルンスト（1888）のこれらの初期のアイデアとの観測が、後膜の生理学の研究に影響を与えたかを考えるために興味深いです。 （MalmivuoとPlonsey、1995年までのレビューを参照してください。WWW上でも利用できる<a href="http://www.bem.fi/book/">http://www.bem.fi/book/</a> ）。イオンチャネルの機能と組織、器官およびシステムの機能に関する細胞生理を理解する上で非常に重要な生体膜の性質について行われているブレークスルーは、この日に、残されています。 外部の[K +]静止膜電位に関する実験的および理論的に派生効果の比較は、膜電位に対するイオンの影響を示している。これと同じ準備を使用して追加実験では、基本的な生理学的な質問に対処するために実行されずに残っている。いくつかは、アトウッドとパーナスによって1968年に戻って強調され、まだ完全に取り組むことにしました。この演習で得られた技術を使うと、1つは他の実験の準備にだけでなく、医療や健康に関連する生理的なアプリケーションの残りの多くの質問に答えるに進むことができます。我々はすべての動物に関連する基本的な質問に対処するためのモデルの無脊椎動物の準備の有用性を実証している。 この上記の練習中のイオンの電気化学的勾配で得た知識で、あなたは今ザリガニの神経筋の準備でシナプス伝達を調べることによって、膜の興奮性に進むことができます。 シナプス応答の測定この研究室の最初の部分、および関連する映画のために提供詳細は、膜電位を記録し、筋肉の構造を調査するための重要なステップを提供している。この研究室の第二部では、相動性および強直運動単位のNMJsで解剖し、記録シナプス伝達のデモでは、生理学の基本的な概念へのエクスポージャーを提供。無傷の動物の部分に関連した挙動を説明するために使用できることができる神経回路への暴露は、だけでなく、彼らの実験室での運動の中でも井の中の神経回路に関する今後の研究のための様々なオープンエンドの質問を調査する学生のための可能性がある確立された無脊椎動物の準備（Kennedy ら、1969;。アントンセンとエドワーズ、2003） これらの製剤はまた、シナプス促進、抑うつとの長期可塑性を（本研究室の研究で検討されていない）を調査するために使用することができます。だけでなく、その自然環境、にもザリガニのいくつかの種の中で、神経可塑性は、実験的な刺激条件（。Cooperら 、1998メルシエとアトウッド、1989）に依存します。どの程度にシナプス伝達効率と筋肉のダイナミクスを変更する機能は、動物を調査するまま提供しています。ザリガニの季節変動と脱皮周期に関連して、その動作を変更しないため、それらの神経筋システムにおいて比較的長期の活動の違いがあります。それは、爪に近い筋の相動運動神経の端末は冬の間に古典的な一過性の形態を示すが、夏季には端子の長さに沿ってより多くの静脈瘤（; Lnenickaと趙、1991 Lnenicka 1993）膨潤となることが示されている。 腹神経索内でザリガニ横の巨大な（LG）の介在で実施されたいくつかの初期の研究では、ギャップジャンクショ​​ン（;渡辺とGrundfest、1961年ジョンソン、1924）の存在を証明した。これはよくCO 2は、ギャップ結合を（ラーノら、1990）脱共役によって、電気通信に影響を及ぼすことが知られています。 Bierbowerとクーパー、、最近ではギャップジャンクションの存在を示すように、このレポートで説明されている感覚- CNS -モーター筋肉回路、2露出をCOにも敏感である、（Bierbower、2010内で神経索と通信することが示された2010） 1960同じまたは隣接するセグメント内の静的な筋肉の受容体の器官（MRO）を焼成トニックは、自発運動の駆動を占めることができればエッカート（1961）検査時なので第3 回運動根の自発的な活動が話題となっている。 （ストラウンら 、2000;ケネディと武田、1965a、B。エッカート、1961）これらの初期の研究では、アクティビティが可能性高い拠点から腹側神経索（VNC）内で駆動されたことが明らかとなった。 CO 2の存在は、自発的活動を停止して以来、人はギャップ結合またはグルタミン酸作動性興奮性ドライブがあるかもしれないどこかドライブの運動ニューロンに想定することができます。 NMJsを塞いだり、展示は、CO 2の存在下でグルタミン酸に感度を減少し、そして彼らは、ブロック可能性がありますされていますCNS内だけでなくヒツジシラミバエ（Bierbower、2010; Bierbowerとクーパー、2010;またBadre らを参照、2005）。 様々な神経修飾物質の作用も容易にNMJsの様々なタイプ（;グリフィスら、2000;。サウサードら、2000;。。ストラウンら 、2000年クーパーとクーパー、2009）で検討されている。さらに、様々な影響は中枢神経系の回路で神経修飾物質によって及ぼされている。それは5 - HTとoctopaminergicニューロンは神経回路の出力を変えることで&quot;ゲイン設定主体&quot;（Ma らとして機能する可能性が示唆されている、1992;。シュナイダーら、1996;。ホーナーら、1997;。エドワーズは、 ら 、2002）。我々は完全に個々の標的細胞に対する神経修飾物質の影響を理解する前に多くの作業が行われるままです。異なる神経修飾物質が互いに協調して動作する可能性があることを考えると、それらの混合作用の解析は今後の研究（Djokaj ら 、2001）のための領域です。さらに、いくつかの研究は、特に脊椎動物では、特定の行動を規制することができます全体の経路上の神経修飾物質の影響に対処する。この感覚- CNS -モータユニットの準備で1つは運動ニューロン（ケネディら 、1969）の活動に関する感覚入力と神経修飾物質の両方の影響を調べることができます。 （。。リビングストンら 、1980;スネッドンら 、2000）が5 - HTは、ザリガニ、ロブスター、カニの行動の状態を調節する役割を果たしていることが仮定されているので、いくつかの試みは、その濃度を決定するためになされているVNC、血リンパ、そしてロブスターの孤立神経節における（リビングストンら、1980;。ハリス、ウォリックとクラヴィッツ1984; Fadool ら、1988。）。しかし、行動のアクションを占めることができる特定の用量反応関係を排除し、記録された測定値にかなりのばらつきがあった。 上昇位置に保持されて爪を持つと、その腹部の下に隠れてテールとザリガニが支配する姿勢（リビングストンら 、1980）を示すと考えられてきた。ザリガニの腹部屈曲の状態が支配的な階層的な状態を（Listerman ら 、2000）を維持しながら、支配的なザリガニが、ペアの中で、社会的相互作用中に示すかという姿勢であることが表示されません。彼らは相手からの撤退として従順なザリガニは、さらに自分自身で自分の腹部を挟むだろう。このようなテール挟み込むも防衛態勢（Listerman ら 、2000）として見られている。これらの動作は容易に（; Bruskiとダナム、1987; Li ら、2000;。。Listermanら 、2000 Bovbjerg、1953、1956）フィールドと実験室の設定で観察されている。興味深いことに、ロブスター（リビングストンら 、1980）に記載の行動姿勢は5 - HTとオーストラリアのザリガニにおけるオクトパミン注射、Cheraxデストラクタ （マクレー、1996）用に反転されています。おそらく、全く別の応答は、オーストラリアのザリガニの浅指屈筋の準備で見られます。優位性は、一般的にザリガニの間で関連する大きさであるためさらに、1つは急速に変更の社会的条件（ストラウンら 、2000）のための非常に塑性応答システムを期待する。無脊椎動物における神経修飾物質に対する反応性の可塑性は、調査のオープンエリアです。 ウィッテンバッハ、ジョンソン、そしてホイ（1999）は、デジタルメディアや他のザリガニの準備に加えて、本レポートに記載され、同じ筋肉を含む様々なザリガニのexperimentationsための実験マニュアルを作成しました。これは、学生の演習のための優れたリソースです。

<ol><li>ザリガニ（ ザリガニ ）。アチャファラヤ生物サプライ（株）、レースランド、LA。、米国。 </li><li>標準的なザリガニ生理食塩水：ヴァンHarreveldのソリューション（1936）から変更された。 （mMで）205のNaCl、5.3 KClを、13.5のCaCl 2 2H 2 O、2.45のMgCl 2 · 6H 2 O、5 HEPES、pHを7.4に調整。セロトニン、グルタミン酸とドーパミンは、ザリガニの生理食塩水で作られています。ブアン固定液を直接使用したとメチレンブルーは、ザリガニの生理食塩水で作られています。すべての化学物質は、シグマケミカル社（セントルイス、MO）から入手されています。 </li><li>解剖ツール：ファイン＃5ピンセット、細かいはさみ、ナイフの刃ホルダー、＃26002から20虫ピン（すべてのファイン科学のツール（米国）、（株）、373 - Gビンテージパークドライブ、フォスターシティー、CA 94404から1139から取得） 。 </li><li> Sylgard底ガラス皿</li><li>ビーカー（薬液を保持する） </li><li>電気信号は、コンピュータにPowerLab 26Tインタフェース（ADInstruments、コロラドスプリングズ、コロラド州、米国）への行に記録されます。我々は、チャートまたはScopeというADInstrumentsから標準のソフトウェアを使用してください。 </li><li>細胞内だけでなく、細胞外記録のためのモデル3000 AC / DCアンプを使用することができます。 </li><li>細胞内記録用のズーム機能で顕微鏡を解剖。可視化端末上で焦点距離の記録のために直立の目標（4 ×と20倍）を持つ化合物の顕微鏡が使用されます。一つは、水銀光源を必要とします。 </li><li>細胞内記録のために我々はガラスキャピラリチューブ（FHC、ブランズウィック、ME、04011、アメリカ合衆国カタログ＃30-31-0）を使用します。細胞内電極は、20〜30オームの抵抗を持つ必要があります。細胞内電極は、3 MのKClを充填した。 </li><li>吸引電極は細胞外シグナルを記録するために使用されます。 </li><li>ファラデーケージ。 </li><li>高輝度の照明装置（光源）。 </li><li>マニピュレーター</li></ol>

膜電位、シナプス応答、神経回路、ニューロモデュレーションとザリガニを使用して筋肉の組織学：学生研究室の演習

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

このレポートの目的は、生物学的膜を横切ってイオン勾配による影響の理解を深めることを支援することです。膜の外側に+ Kの（1）イオンの濃度、および特定のイオンに対する膜の（2）透過性：細胞の膜電位に影響を与えると我々はこれらの実験に取り組むその二つの側面があります。ザリガニ腹部伸筋は、それらの生化学的及び生理学的な表現型で、だけでなく、その構造にあるというトニック（遅い）と相性その他（高速）とのグループ内にあります。これらの筋肉を支配する運動ニューロンは機能的特徴に対応して異なっている。我々はこれらの筋肉だけでなく、シナプス伝達の特性を実証するために表面的、強壮腹部屈筋を使用。さらに、我々は回路の一部にはクチクラ感覚刺激の効果だけでなく、神経修飾物質の影響を実証するために感覚CNS -運動ニューロン筋の回路を紹介します。この演習で得られた技術を使うと、1つは他の実験の準備にだけでなく、医療や健康に関連する生理的なアプリケーションの残りの多くの質問に答えるために始めることができます。我々はすべての動物に関連する基本的な質問に対処するためのモデルの無脊椎動物製剤の有用性を実証している。

実験は、筋肉の構造、シナプス応答、イオン勾配や膜電位に対する透過性の影響を調べるには経験を積むために学生のための簡単​​なアプローチを示しています。また、感覚 - CNS -モーター筋回路は、神経回路上に化合物の影響をテストする手段を示すために提示されます。

本レポートの目的は、生物学的膜を介したイオン勾配によって生じる影響への理解を深めることにある。……という2つの側面がある。

以下の一連の実験の全体的な目的は、興奮性膜の特性と静止膜電位のイオン的基盤を理解し、膜電位の測定方法を習得すること、およびシナプス伝達の特性を実証することである。実験の一方では、細胞外カリウム濃度を変化させながら静止膜電位を測定する。また別の実験では、さまざまな運動単位における刺激誘発性のシナプス応答を記録することにより、シナプス分化のメカニズムを調査する。次に、維持が容易な神経回路を紹介します。この調製法は、感覚器から中枢神経系（CNS）、運動ニューロン、そして筋肉へと至る回路のさまざまな側面に関する研究だけでなく、教育目的でも利用可能です。一連の実験により、膜電位、シナプス統合と伝達、および筋線維型の構造的な違いに関する課題に取り組む上で、ザリガニモデルがいかに有用であるかが示されます。電気生理学的な概念と手法を教える上で、ザリガニの標本を用いる主な利点は、解剖が容易であること、最小限の生理食塩水で標本の生存能を維持できること、シナプス応答を得やすいこと、そして筋肉の全体的な解剖学的配置を判別しやすいことです。これらの手法は他の標本にも適用可能であり、シナプス生理学と変調に関する理解を深めるとともに、実演した標本の生化学的および構造的な違いについての知見を広げることができます。手術を開始するには、体長約 6 to 10 cm のザリガニを選び、砕氷の中に 5 分間置いて麻酔をかけます。ザリガニの頭部を切除するには、大きなハサミを使用し、指がザリガニのハサミや口に届かないように注意しながら、頭の後方を持って固定してください。ザリガニの目の後ろ側からきれいに切断して速やかに頭部を除去し、怪我を防ぐために脚と鉗子脚を取り除きます。雄の生殖肢（style）および雌雄両方の遊泳脚を取り除きます。除去した頭部と付属肢は廃棄してください。次に、腹部と胸部をつなぐ関節膜に沿って切り込みを入れ、腹部を胸部から切り離します。ザリガニの腹部を保存し、胸部は廃棄してください。ハサミの先を腹側へ向けてわずかに傾け、腹部両側の外側下縁に沿って殻に切り込みを入れます。このとき、ザリガニの体に深く切りすぎないように注意してください。ピンセットを使用して、ザリガニの各節の長さに沿った甲殻の自然な走行線に従います。腹部の筋肉を傷つけないように注意しながら、甲殻の腹側部分を上に持ち上げて後ろに引くことで取り除きます。屈筋を除去します。この時点で、深指屈筋の上に白い組織の塊が見えます。この組織をピンセットで慎重に除去してください。深指屈筋の正中線に沿って、胃腸管（GI tract）が小さな管として見えます。ピンセットで上部を挟み、腹部から引き離して除去してください。その後、尾の末端で胃腸管の下部を切断します。解剖部位を生理食塩水で洗浄し、糞便などの老廃物が標本の調製を妨げないようにします。解剖用ピンを用いて、標本の上下の角をSガードコーティングされたペトリ皿に固定します。これで腹部伸筋が露出します。細胞内記録を行うまで、標本が浸るようにペトリ皿に生理食塩水を注ぎます。ペトリ皿を顕微鏡上に移動させ、皿の下にワックスを敷いて固定し、動かないようにします。細胞内記録に使用する装置はこの図に示されています。適切な接続方法および設定については、付随するテキストに記載されています。指示に従ってラボチャートソフトウェアをセットアップしてください。付随するテキストに従い、接地線を生理食塩水バスの中に配置します。3 Mの塩化カリウムを満たしたガラスマイクロピペットの先端を生理食塩水バスに入れ、電極抵抗を測定します。電極抵抗は20～60 MΩである必要があります。アンプの粗調整ノブを使用して、高強度照明下でラボチャート上のラインをゼロに移動させます。顕微鏡を覗き、縦方向のDEM筋を特定します。電極プローブを用いて、DEM筋の筋線維に細胞内電極を刺入します。電極は筋線維にわずかに刺入するようにしてください。細胞を完全に貫通させないように注意してください。静止電位の振幅を測定します。チャートウィンドウの左下隅にある位置から、Mカーソルをトレース上にドラッグしてください。マーカーMを基線上に配置し、カーソルを記録された信号の最低点まで移動させます。マーカーとアクティブカーソルの差が画面の右上に表示されます。この値が静止膜電位の電圧となります。記録された電圧を増幅倍率で割ります。この場合は10倍の増幅が使用されました。次に、電圧をボルトからミリボルトに変換します。その筋線維の静止電位を記録した後、顕微鏡で確認しながら、筋線維から電極を慎重に抜いてください。他の筋線維で細胞内記録を繰り返します。この実験の次のパートでは、細胞外カリウム濃度の上昇が静止膜電位に及ぼす影響をモニタリングします。カリウム濃度が5.4、20、40、60、80、および100 millimolarの6種類のザリガニ生理食塩水を使用します。記録の間隔で、次の細胞内記録を行うために、まだ収縮していない筋肉を選択します。浴液を、一段階高い濃度の塩化カリウム溶液に交換します。その際、毎回必ず標本全体が完全に浸るようにしてください。各溶液における膜電位の変化を記録します。細胞外カリウム濃度を上昇させた際の影響として、膜電位がこのスクリーンキャプチャに示されています。細胞外カリウム濃度を横軸（片対数グラフ）、膜電位を縦軸として、各カリウム濃度における静止膜電位をプロットしてください。細胞外カリウム濃度 5.4 millimolar における静止電位を基準線として揃えてください。想定曲線と実測曲線を比較し、実測線の傾きを想定線の傾きと比較します。これらの電気生理学的記録を終えた後、次のステップとして、筋線維の解剖学的構造およびその神経支配パターンを検討します。標本をスタンディングディッシュに移し、メチレンブルーを添加します。5分後、メチレンブルーを除去し、新鮮なザリガニ生理食塩水を加えます。体節内の筋肉を支配する主神経を探します。1つの体節におけるS-E-M-D-E-L 2D EL、およびDEM筋肉への神経支配パターンをスケッチしてください。次に、準備した試料をドラフトチャンバーの下に移動させます。生理食塩液を取り除き、固定液を加えます。ここではポイン溶液を固定液として使用します。ドラフトチャンバーを使用する目的は、固定液の蒸気を吸い込まないようにすることです。この溶液が皮膚に触れたり、目に入ったりしないよう十分に注意してください。目に刺激を感じた場合は、すぐに洗眼器で目を洗ってください。ボイン溶液を標本に約10分間浸し、その後ピペットを用いて溶液を生理食塩水に置換します。DEL 1またはDEL 2筋肉の薄いセグメントを切り出し、スライドガラス上に配置します。スライドにラベルを貼ります。SEM筋肉についても同様の手順を繰り返します。複合顕微鏡を用いて、両方の組織標本におけるサルコメアの横紋パターンを観察してください。次の実験シリーズでは、ザリガニの腹部筋肉におけるシナプス応答の記録方法について検討します。別のザリガニを選択し、脱頭します。胸部と肢を除去し、手術の手順に示されているように腹部伸筋を露出させてください。このビデオの最初のセクションでは、顕微鏡を使用して、伸筋へ向かう運動軸索を含む神経を探します。最も神経にアクセスしやすいセグメントを探してください。神経は白色で、ピペットを用いて生理食塩水を標本に吹きかけるか、標本に軽く息を吹きかけることで視認できます。これにより神経が動き、特定しやすくなります。マイクロマニピュレーターで保持した吸引電極を神経の直上に配置します。シリンジをゆっくりと引いて、神経を電極内に吸引します。顕微鏡を通して、電極に神経が吸い込まれる様子を確認できます。付属の記事の指定に従って、ラボチャートソフトウェアの設定を調整してください。3 Mの塩化カリウムを満たしたガラス微小電極を用意し、ヘッドステージおよびPowerLabに接続します。アンプの粗調整ノブを使用して、ラボチャート上の線をゼロに合わせます。電極を挿入する前に、トグルスイッチを数回オン・オフに切り替えてください。電極の抵抗値をテストするには、得られた値の振幅を測定します。顕微鏡を覗きながら、電極プローブを用いて、DEMまたはDL1、あるいはDL2のいずれかの縦走筋線維に電極を挿入します。この際、筋線維を貫通させないように注意してください。これで実験の準備が完了しました。吸引電極を用いて分節神経束を刺激し、ガラスマイクロ電極を用いて筋線維からのシナプス応答を記録します。グラフト刺激装置を起動し、位相性反応を得るために神経を1 Hzで刺激します。次に、電極をSEL筋線維に挿入します。SELは緊張性筋肉です。緊張性反応を得るために、10 Hzの短時間パルスバーストで神経を刺激します。記録されたDEL筋とSEL筋の反応を比較してください。位相性DEL筋のシナプス反応は、緊張性SEL筋よりも振幅が大きいことに注目してください。次の実験セットでは、伸筋ではなくザリガニの屈筋に焦点を当てます。新しいザリガニを用い、この手術で示すように腹部を分離します。このビデオの最初のセクションでは、分離した尾の準備試料を生理食塩水で満たしたペトリ皿に入れ、尾と準備試料の上部をピンで固定します。腹側屈筋を用いたdecarbo実験では、腹側神経索を損なわずに残す必要があることに注意してください。メスを使用して、標本の腹側にある2本の肋骨の間の関節膜に沿って縦方向に切開します。この際、深く切りすぎると運動神経根を断裂させる恐れがあるため、表面の筋肉を損傷しないよう十分に注意して切開してください。次のステップに進みます。顕微鏡で観察しながら、ハサミまたはメスを用いて、筋肉を覆っている薄い膜層の縦切り部分から水平に切開します。切開部を広げて関節膜のフラップを作り、そのフラップを上方に持ち上げます。ハサミを用いて、表層屈筋からの細胞内記録を行うために、表層屈筋を露出させるフラップを切除します。静止膜電位および腹伸筋からのシナプス応答の記録に使用したものと同じ器具とセットアップを使用してください。 l前述と同様に、3 molar 塩化カリウムを満たした細胞内電極を使用します。電極を浅層屈筋の筋線維に挿入します。その際、筋肉を貫通しないように注意してください。EPSPの自発的活動を記録します。EPSPのサイズの違いや、IPSPが存在するかどうかを確認してください。小さな絵筆を取り、記録電極が含まれているセグメント内のクチクラ縁に沿って慎重に刺激します。もしより大きな反応が見られた場合は、刺激によるEPSPの頻度やサイズの変化に留意してください。これは、感覚神経の発火の変化に反応して、追加の運動ニューロンが動員されたことを示しています。生理食塩水バス溶液を、1 µM のセロトニンなどの神経調節剤を含む溶液、または二酸化炭素をバブリングした生理食塩水に注意深く交換します。その後、絵筆による刺激を繰り返します。バス溶液の変更が記録された活動に及ぼす影響を確認してください。バス液の生理食塩水を通常のものに戻し、筋線維の活動がベースラインに戻ることを確認します。この図は、表在屈筋線維で記録されたEPSPを示しています。EPSPの大きさがそれぞれ異なることに注意してください。この実験の次の段階では、細胞外電極を用いて、感覚神経から中枢神経系（CNS）を経て運動ニューロンへと至る回路の活動に反応する運動ニューロンの活動電位をモニタリングします。まず、感覚神経を刺激するための吸引電極を作製します。プラスチックチューブの一部を炎で加熱して引き伸ばします。次のステップは、チューブを希望のサイズに切り詰めることです。そのためには、準備した神経を確認し、吸引電極の適切な開口径を判断する必要があります。ザリガニの個体サイズによって、神経束の直径は約1mmから数mmまで異なります。チューブの伸展した部分をカットし、神経を保持するためのチップ先端の開口部を適切なサイズに調整します。開口部が大きすぎると神経が脱落する可能性があり、小さすぎると電極による圧力で神経が損傷する可能性があります。プラスチックチューブをガラス製吸引電極の先端に取り付けます。電気生理学的およびソフトウェアの設定は、細胞内記録の設定と比較して、細胞外応答のモニタリングとはわずかに異なります。付随する記事に指定された装置を用いて、浅指屈筋を支配する3番目の神経経路を吸引電極内に吸引します。これで活動電位の記録を開始できます。この経路には5つの興奮性運動ニューロンと1つの抑制性運動ニューロンが存在します。基線活動を記録した後、ブラシで角皮を刺激し、生成される活動電位の変化を観察してください。次に、前回の実験と同様に、バス溶液をセロトニンなどの神経調節物質に置換し、反応の変化を記録します。追加の演習は付随するテキストに記載されています。この記録は、ブラシで角質を刺激する前と刺激中の第3経路から記録された活動電位を示しています。刺激前の活動電位の頻度と、刺激中の頻度を比較してください。この記録は、正常生理食塩水およびセロトニン溶液中での第3ルートから記録された活動電位を示しています。正常生理食塩水中の活動電位の頻度と、先ほど示したセロトニン中の頻度を比較してください。刺激（ブラッシング）により、ベースラインよりも発火頻度が増加します。また、セロトニンによって、生理食塩水の場合よりも発火頻度が増加することも示されました。この図は、ブラッシングとセロトニンを併用すると、発火頻度がさらに大きく増加することを示しています。外部カリウム濃度が静止膜電位に及ぼす影響について、外部から得られた結果と理論的な導出結果を比較することで、イオンが膜電位に与える影響が明らかになります。また、速筋および遅筋の両方の神経筋接合部におけるニコチン性反応の記録方法についても説明しました。これらの手法は、生理学の基礎概念を教えるための学生向け研究実習に利用できます。この実験演習で習得した技術は、他の実験準備に関連する疑問への回答や、医学および健康に関連する生理学的応用に使用することが可能です。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

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