視神経損傷ラットモデルにおけるミエリン損傷の電子顕微鏡的解析

対照ラットおよび視神経損傷ラットから固定視神経切片を採取します。

対照切片は、同心円状の原形質膜層を含む密集したミエリン鞘を有する軸索を示す。負傷した部分には、大きな隙間のある解圧されたミエリンが見られます。

脂質に結合し、ミエリン鞘のコントラストを高めるオスミウム-フェロシアン化物複合体とインキュベートします。

チオカルボヒドラジドで処理して、オスミウムの追加の結合部位を作成します。

オスミウムを再塗布して、脂質コントラストをさらに強化します。

重金属で染色すると、高分子に結合して構造のコントラストが強調されます。

アルコール濃度を上げて脱水し、樹脂包埋用としてアセトンですすいでください。

レジンにティッシュを埋め込み、レジンに金をコーティングすると画質が向上します。

シリアルブロックフェース走査型電子顕微鏡を使用して、スライスとイメージングを同時に行います。電子ビームを表面に集束させ、反射電子を検出して画像を生成します。

ミエリン鞘は暗く見えますが、損傷した鞘内の空間は明るく見えるため、正常なミエリンと損傷したミエリンを区別できます。