脳組織における病原体の免疫組織学的検出

パラフィンに埋め込まれたホルマリン固定ヒト脳組織を例にとってみましょう。この組織は、細胞内と細胞外の両方に存在する病原性微生物を示します。

洗ってパラフィンを取り除き、アルコール濃度を下げて組織を再水和します。

酸性緩衝液で加熱してホルマリン誘導性タンパク質架橋を切断し、細菌の抗原性エピトープのマスキングを解除します。

塩化アンモニウムとインキュベートして、固定中に形成される残留反応性アルデヒド基を中和し、抗体との非特異的相互作用を防ぎます。

界面活性剤で処理して細胞膜を透過化し、抗体の浸透を促進します。

ブロッキング溶液を塗布して、非特異的抗体の結合を防ぎます。

細胞外および細胞内微生物を標的とする一次抗体とインキュベートします。

一次抗体に結合する蛍光色素標識二次抗体を塗布します。

蛍光DNA結合色素を添加して核を染色します。

自家蛍光エリミネーターで処理して、自家蛍光細胞内顆粒からの蛍光を消光し、バックグラウンドシグナルを最小限に抑えます。

蛍光顕微鏡を使用して、組織を検査し、微生物の存在を確認します。