Name: 透過処理神経成長円錐におけるローダミン-アクチンとF -アクチンばら両端にラベルを付ける (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-17T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: 学ぶ神経成長円錐におけるF-アクチン両端の可視化法。サポニン透過処理とローダミン-アクチン標識により、アクチン動態を蛍光顕微鏡で定量化し、軸索誘導因子の影響を解析する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、博士はジェームズBamburgとこれらの研究におけるコラボレーションのための彼の研究室のメンバーに感謝。この作品は、NIHの助成金HD19950、EY07133で、ミネソタ医学財団からの補助金によって賄われていた。

<ol><li>Lowery, L. A., Van Vactor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trip+of+the+tip%3A+Understanding+the+growth+cone+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The trip of the tip: Understanding the growth cone machinery.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10, 332-343 (2009).</li>
<li>Letourneau, P. Axonal Pathfinding: Extracellular Matrix Role. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLetourneau%2C+P+%22Encyclopedia+of+Neuroscience%22">Encyclopedia of Neuroscience</a>. Squire, L. R. , Academic Press. Oxford. 1139-1145 (2008).</li>
<li>Kalil, K., Dent, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Touch+and+go%3A+Guidance+cues+signal+to+the+growth+cone+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobio%22%5BJournal%5D)">Touch and go: Guidance cues signal to the growth cone cytoskeleton.</a> Curr Opin Neurobio. 15, 521-526 (2005).</li>
<li>Dent, E. W., Gertler, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoskeletal+dynamics+and+transport+in+growth+cone+motility+and+axon+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cytoskeletal dynamics and transport in growth cone motility and axon guidance.</a> Neuron. 40, 209-227 (2003).</li>
<li>Pak, C. W., Flynn, K. C., Bamburg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin-binding+proteins+take+the+reins+in+growth+cones%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Actin-binding proteins take the reins in growth cones.</a> Nat Rev Neurosci. 9, 136-147 (2008).</li>
<li>Guan, K. L., Rao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+mechanisms+mediating+neuronal+responses+to+guidance+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Signaling mechanisms mediating neuronal responses to guidance cues.</a> Nat Rev Neurosci. 4, 941-956 (2003).</li>
<li>Gallo, G., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+growth+cone+actin+filaments+by+guidance+cues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Regulation of growth cone actin filaments by guidance cues.</a> J. Neurobiology. 58, 92-102 (2004).</li>
<li>Fass, J., Gehler, S., Sarmiere, P., Letourneau, P., Bamburg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+filopodial+dynamics+through+actin-depolymerizing+factor%2Fcofilin%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Sci+Inter%22%5BJournal%5D)">Regulating filopodial dynamics through actin-depolymerizing factor/cofilin.</a> Anat Sci Inter. 79, 173-183 (2004).</li>
<li>Bernstein, B. W., Bamburg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADF%2Fcofilin%3A+A+functional+node+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">ADF/cofilin: A functional node in cell biology.</a> Trends Cell Biol. 20, 187-195 (2010).</li>
<li>Marsick, B. M., Flynn, K. C., Santiago, M., Bamburg, J. R., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+ADF%2Fcofilin+mediates+attractive+growth+cone+turning+toward+nerve+growth+factor+and+netrin-1%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Activation of ADF/cofilin mediates attractive growth cone turning toward nerve growth factor and netrin-1.</a> Dev Neurobiol. 70, 565-588 (2010).</li>
<li>Symons, M. H., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+actin+polymerization+in+live+and+permeabilized+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Control of actin polymerization in live and permeabilized fibroblasts.</a> J Cell Biol. 114, 503-513 (1991).</li>
<li>Chan, A. Y., Raft, S., Bailly, M., Wyckoff, J. B., Segall, J. E., Condeelis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGF+stimulates+an+increase+in+actin+nucleation+and+filament+number+at+the+leading+edge+of+the+lamellipod+in+mammary+adenocarcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">EGF stimulates an increase in actin nucleation and filament number at the leading edge of the lamellipod in mammary adenocarcinoma cells.</a> J Cell Sci. 111, 199-211 (1998).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

メソッドは、成長円錐の移行の主要なマージンにおけるアクチン細胞骨格の動的変化に関与する細胞成分の時間的および空間分解能を可能にするここで紹介。急速にアクチンフィラメントの重合を促進するNGFまたはネトリンのような誘引分子の作用は、図1及び図2に示すように活性化されたADF /コフィリン10でアクチンフィラメント切断によって作成されたアクチンとげが終了、、で地元の増加として明らかにされます。メソッドは、ラディキシン、図3と図4に描かERMタンパク質、などの成長円錐chemotropic応答を、媒介に関与する他のタンパク質の局在化を可能にします。これらのメソッドは、移行するニューロン、グリア細胞または他の細胞型においてアクチンに基づく運動の調節を分析するために適用することができます。 成長円錐または他の小さな運動性の構造の微妙な性質は、このメソッドの使用の大幅な制限です。成長円錐リーディングマージンまたはセルの類似した運動性の領域は、アクチンフィラメントと形質膜以外のいくつかの構造的な要素が含まれているので、一歩ごとに注意する必要があります。ソリューションが交換さ...

<table><tbody><tr><td>18x18 mm カバースリップ</td><td>Gold Seal</td><td>3305</td><td></td></tr><tr><td>35mm ペトリ皿</td><td>Falcon BD</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>水槽用セメント</td><td></td><td>DAP 100% シリコン水槽用シーラント</td><td>市販のホームセンター</td></tr><tr><td>Poly-D-lysine (mw &amp;gt; 300,000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1024</td><td></td></tr><tr><td>天然マウスラミニン</td><td>Invitrogen</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>L1 CAM</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>777-NC</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-fluor 350 ファロイジン</td><td>Invitrogen</td><td>A22281</td><td></td></tr><tr><td>ローダミン非筋肉アクチン</td><td>Cytoskeleton, Inc.</td><td>APHR-A</td><td></td></tr><tr><td>F12 培地</td><td>Invitrogen</td><td>21700-075</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Slowfade</td><td>Invitrogen</td><td>536937</td><td></td></tr></tbody></table>

透過処理神経成長円錐におけるローダミン-アクチンとf -アクチンばら両端にラベルを付ける

Labeling F-actin Barbed Ends with Rhodamine-actin in Permeabilized Neuronal Growth Cones

成長する軸索の運動性のヒントは、成長円錐と呼ばれています。成長円錐は、成長円錐の受容体に結合し、ダイナミクスと成長円錐細胞骨格3-6の組織を制御するローカルで表される分子指導の手がかりとの相互作用によって開発組織を通じて軸索をナビゲートつながる。これらのナビゲーション信号の主な目標は、継続的なアクチンの重合と動的な改造7まで成長円錐の外周部とそのドライブの成長円錐の運動性を満たすアクチンフィラメントの網細工です。正または魅力的な指導の手がかりは、刺激アクチンフィラメント（F -アクチン）誘引キューのソース近いです成長円​​錐の周辺の地域における重合によって回転成長円錐を誘発する。このアクチンの重合は、主要なマージンと誘引に向かって軸索伸長のローカル成長円錐の突起、付着を駆動します。 アクチンフィラメントの重合は、十分なアクチンの単量体の可用性にし、モノマーの添加のための重合核やアクチンフィラメント有刺鉄線端に依存します。アクチン単量体はニワトリ網膜および後根神経節（DRG）成長円錐における豊富に入手可能です。無料のF -アクチン有刺鉄線両端がモノマーの添加のために利用可能になった場合、その結果、重合が急速に増大する。これはひよこDRGと誘引80から10に近い成長円錐の領域でのF -アクチン切断するタンパク質のアクチン脱重合因子（ADF /コフィリン）の局所活性化を介して網膜成長円錐で発生します。この強化されたADF /コフィリンの活性は、重合のた​​めの新しいF -アクチン有刺鉄線両端を作成するためにアクチンフィラメントを切断。次のメソッドは、このメカニズムを示しています。 F -アクチンの合計含有量は、蛍光ファロイジンで染色して可視化される。 F -アクチンとげがある両端が他の運動性の細胞が11、12の以前の研究から適応され、以下で説明する手順で透過処理される成長円錐内にローダミン-アクチンの取り込みにより可視化。ローダミン-アクチンはとげがある両端にアクチン単量体の付加のための臨界濃度以上の濃度で添加されている場合、ローダミン-アクチンは、無料のタケノコの端の上に組み立てます。魅力的な合図がそのような成長円錐の片側に位置し、マイクロピペットから放出されるものとして、勾配で提示されている場合は、F -アクチン上にローダミン-アクチンの取り込みは、とげの端は、マイクロピペット10に向けて成長円錐の側に大きくなる。 成長円錐は、小さくて繊細なセル構造です。透過、ローダミン-アクチン取り込み、固定および蛍光可視化の手順はすべて慎重に行われており、倒立顕微鏡のステージ上で行うことができる。これらのメソッドは、移行するニューロン、他の主要な組織の細胞または細胞株におけるローカルアクチンの重合を研究に適用することができます。

神経成長円錐におけるF -アクチン有刺鉄線両端を視覚化し、定量化する方法が記載されている。ガラス製カバースリップ上で培養ニューロン後、細胞をサポニン含有溶液に透過処理されています。その後、ローダミン-アクチンを含むサポニンバッファと短いインキュベーションは無料アクチン有刺鉄線端上に蛍光アクチンを内蔵しています。

透過処理神経成長円錐におけるローダミン-アクチンとF -アクチンばら両端にラベルを付ける

伸長する軸索の可動性の先端部分は、成長円錐と呼ばれます。成長円錐は、局所的な環境と相互作用することで、発達中の組織内をナビゲートする軸索を誘導します。

本実験の全体的な目的は、軸索誘導因子に曝露されたニューロンの成長円錐において、アクチン重合が可能な遊離f-actinのバーブ端（barbed ends）の位置と数を可視化することです。まず、カバーグラス上で培養したニューロンをサポニン含有緩衝液に浸し、成長円錐の透過性を高めます。次に、細胞をルミネン・アクチン含有緩衝液に4分間曝露し、ルミネン・アクチンを成長円錐内に進入させ、遊離f-actinのバーブ端に重合させます。最後に、F-actinの分布を維持するために、細胞を化学的に固定し、洗浄します。ルミンアクチンを取り込んだバーブドエンドについて、蛍光顕微鏡観察および定量的な画像解析に基づいた結果が得られ、誘引性のガイダンスキューによって遊離F-actinの数が増加することが示されました。移動する成長円錐の先端にあるバーブドエンド。こんにちは、ミネソタ大学医学部神経科学科のポール・エルノです。今日は、ニワトリ神経成長円錐の培養準備について実演します。成長円錐において、アクチンフィラメントのバーブ端（barbed ends）を可視化する方法を実演します。アクチンフィラメントは、軸索が胚内を走行してシナプス標的に到達する際に、軸索を前進させる原動力となる動的な細胞骨格成分です。本法はアクチンダイナミクスおよび神経成長円錐の研究に用いていますが、グリア細胞、神経堤細胞、あるいは遊走ニューロンなどの他の運動性神経細胞にも適用可能です。以下に手順を実演します。本日は、研究室メンバーであるポストドクトラルフェローのBonnie Marek氏と、MD PhD学生のJose San Miguel Ruiz氏が、ニューロンのアクチンをラベル化するために使用するビデオディッシュの作製を行います。18 mm角または24 mm円形のガラスカバースリップを蒸留水でリンスし、乾熱滅菌器で3ヶ月以上焼成します。カバースリップの洗浄方法については、オーブン焼成以外の方法で代用することも可能です。コルク穴あけ器などの器具を用いて、35 mmまたは50 mmのプラスチック製ペトリ皿または組織培養皿の底に、適切な直径の円形の穴を開けます。その後、開けた穴の縁をハサミで削り、両面の表面を滑らかにします。次に、洗浄済みのカバーガラスをシリコン製アクアリウム用セメントを用いて各ディッシュの穴の上に接着し、ディッシュを滅菌蒸留水で数回洗浄します。これでディッシュに基質をコーティングする準備が整いました。100 µg/mLのPDLおよびPBS溶液をカバーガラスまたはビデオディッシュに塗布し、加湿された38 °Cのインキュベーター内で2〜4時間インキュベートします。PDL溶液を吸引し、カバーグラスを滅菌蒸留水で3回洗浄した後、風乾させます。次に、5 mgのニトロセルロースを5 mLのアミル酢に溶解し、1%ニトロセルロース溶液を調製します。この溶液を10 µL、カバーグラスの上部に滴下し、傾けて表面全体に広げ、約10分間風乾させます。最後に、25 µg/mLのラミニン、または4 µg/mLのL1 CAMおよびPBSを250 µL適用し、ニトロセルロース表面全体に広げます。加湿された38 °Cのインキュベーター内で6〜8時間インキュベートします。その後、組織培養フード内で基質を吸引し、基質を乾燥させないように注意しながら、直ちに培養液を加えます。説明。後根神経節（DRG）または網膜神経組織の培養は、胚齢7日のニワトリ胚を解剖して調製します。DRG外植片は神経節全体の半分とし、網膜外植片は直径1 mm以下とします。実体顕微鏡下で、ピンセットを用いて説明（explan）をカバーガラス上に配置します。次に、インキュベーターへ運搬する際の移動を防ぐため、カバーガラスの中央に軽く押し付けます。カバーガラスを載せたディッシュを慎重に移動させ、加湿された温熱インキュベーター内で一晩、または18時間静置します。この期間中、外植片から数百ミクロンの軸索が伸展します。サポニンA TPとLOR three 50 feinを加えて、ルミンアクチン透過バッファーを調製します。このバッファーの組成は、書面によるプロトコルに記載されています。同一の成分に0.45 µMのermine非筋肉アクチンT率を加えた別の溶液を調製し、ボルテックスで混合して、神経細胞を透過処理および標識します。DRGまたは網膜インプラントが入った培養皿をインキュベーターから慎重に取り出し、以下の手順を室温で実施します。ピペットを使用して培養液を慎重に除去し、細胞を覆うのに十分な量の透過バッファーを加え、1分間インキュベートします。透過バッファーを慎重に除去し、0.45 µMのウシ非筋肉アクチンを含むバッファーに交換して4分間インキュベートします。最後に、ウシアクチン含有バッファーを除去し、4%パラホルムアルデヒドおよび0.05%グルタルアルデヒドを用いてニューロンを5分間固定します。PBSで慎重に洗浄し、Slow Fadeを用いて3インチガラススライドに封入します。R domine actinの取り込みを最適に定量化するためには、60倍の油浸対物レンズを備えた落射型蛍光顕微鏡を使用し、f actin、バーブドエンドへのR domine actinの組み込み、および成長円錐におけるf actinの蛍光ラベル化を可視化してください。すべての画像は、デジタルカメラの感度ゲインと露光時間を各画像で同一に設定し、単一のセッションで収集する必要があります。MetaMorph Image Jまたは同様の画像解析ソフトを用いて、同等の領域からラベル化の状態を解析してください。この手順には、いくつかのバリエーションを適用することも可能です。一つのバリエーションとして、F-actinおよびバーブドエンドに加えて、他のタンパク質を局在化させるための免疫化学的手法が挙げられます。取り込まれたrh-actinを固定し、PBSで洗浄した後、別の成長円錐構成要素に対する抗体を添加し、続いて洗浄、ブロッキングを行い、rh-actinおよび蛍光標識ファリンとの三重標識に適した蛍光二次抗体を用いてインキュベーションを行います。3つ目のバリエーションでは、成長因子またはガイダンスキューを塗布した培養皿をインキュベーター内で5〜15分間静置した後、皿をインキュベーターから取り出して透過処理を開始し、F actinおよび遊離バーブド端へのガイダンスキューの影響を評価します。これにより、成長因子やガイダンスキューがF actinおよび遊離バーブド端に及ぼす短期的影響を評価することが可能になります。あるいは、神経細胞を培養したビデオディッシュを保温した顕微鏡ステージ上に置き、マイクロピペットを用いて成長因子またはガイダンスキューを放出し、神経成長円錐に勾配を形成させてから、透過処理および rhodamine actin の取り込みを開始します。成長因子は、透過処理を開始する1〜2分前という短時間で導入することが可能です。透過および固定は、ビデオディッシュを顕微鏡ステージに置いたまま行うことができます。これにより、ガイドキューの勾配が成長円錐におけるF ACTおよび遊離バーブ端の形成に及ぼす局所的な影響を評価できます。このビデオでは、NGFの全体的な添加に反応して、成長円錐の最外縁（modal growth cone margin）が急速に拡大する様子を示しています。DRG成長円錐に神経成長因子を5分間全体的に処置すると、前縁部でアクチン重合が刺激され、成長円錐の周囲にルミニンアクチンの取り込みによる明るい帯状の領域が見られます。このビデオでは、NGFを放出してNGF濃度勾配（ここに表示）を形成しているマイクロピペットに向かって、成長円錐が方向を変える様子を示しています。A DRG成長円錐の一方が2分間NGF濃度勾配にさらされると、F-actinへのR-domine actinの取り込みと自由なバーブドエンドが局所的に刺激され、増加します。この例では、リン酸化RIN ridin moinの分布が免疫化学的に明らかにされています。NGFを全体的に添加した際のR-domine actinの取り込みによるF-actinおよび自由なバーブドエンドの標識に加え、ここではDRGニューロンにGFP-actinとドミナントネガティブezrin ridin moisan構築物を共導入しました。F-actinバーブドエンドの標識の5分前にNGFを添加しました。ドミナントネガティブERMコンストラクトを導入した成長円錐では、成長円錐の先端辺縁におけるf-actinのバーブ端（barbed ends）が少ないことが分かります。これは、近接する未処理の成長円錐とは対照的です。この手順を免疫化学的手法と組み合わせることで、f-actinおよびバーブ端の局在を、アクチンのダイナミクスと組織化を制御する他のタンパク質の分布と関連付けることができます。この手順を行う際は、脆弱な成長円錐の構造を破壊しないよう十分注意することが重要です。

labeling-f-actin-barbed-ends-with-rhodamine-actin-permeabilized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このようなニューロンの樹状突起のような複雑な細胞の形状は、開発中に達成されるかを理解するために、それは正確にアッセイの微小管の組織にできることが重要です。ここでは、樹状突起分枝のニューロン感覚樹状突起の微小管の組織、気管、筋肉を調べるために堅牢な免疫標識法を説明し、他の...

免疫組織学的な感覚ニューロンの樹状突起における微小管の標識、気管、との筋肉ショウジョウバエ幼虫の体壁

このビデオは、顕微鏡検査のためにラット皮質ニューロンを蛍光染色する手順を示しています。F-アクチンと樹状タンパク質を標的とし、構造的完全性を解析し、神経細胞の機能と健康を研究するために重要なF-アクチン密度を計算します。...

ラット皮質ニューロンにおける糸状アクチンプンクタの定量化

出典:Alluri, H., et al.Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction. J. Vis. Exp.

内皮細胞におけるタイトジャンクションタンパク質およびストレスファイバーの蛍光局在

糸状アクチン(F-アクチン)は、スピノジェネシス、シナプス可塑性、およびシナプス安定性において重要な役割を果たします。したがって、F-アクチンpunctaの定量化は、シナプス構造の完全性を研究するための有用なツールです。このプロトコルは、低密度の初代皮質ニューロン培養物でファロイジンで標識されたF-アクチンプンクタを定量化する手順を説明しています。...

ラット皮質ニューロンにおける繊維状アクチン（F-アクチン）涙点の定量化

軸索誘導分子は、ニューロンの移動と標的を絞った成長円錐のナビゲーションを調節します。私たちは、ガイダンス分子がニューロンを引き付けたり反発したりする能力を評価するための強力な方法であるストライプアッセイを紹介します。このプロトコルでは、FLRT2が培養された海馬ニューロンを撃退する能力を示すことにより、ストライプアッセイを実証します。...

ストライプアッセイは、解離海馬ニューロンを用いたタンパク質基質の魅力や反発作用を検討します

初期エンドソーム機能 F アクチンの重合によって決まります。ここで、この複雑な一連の反応の生化学的・遺伝的影響を受けやすいレンダリング核生成と、試験管の初期エンドソーム膜に...

体外初期エンドソームの F-アクチンの重合

どのように FRAP など photoactivation のマイクロ ・ photomanipulation...

マイクロマニピュレーション技術形成ダイナミクスの解析と細胞骨格のレギュレータの売り上げ高

親油性蛍光色素を用いたショウジョウバエ胚性運動ニューロンの逆行トレース方法について説明する。...

親油性蛍光色素を用いたショウジョウバエ胚性運動ニューロンの逆行トレーシング

げっ歯類やヒト被験者の脳組織から 生き生きとした...

げっ歯類とヒト脳組織におけるアクチン重合状態評価のための時間効率の高い蛍光分光法ベースアッセイ

このプロトコルは、 その場で 軸索の成長および成長円錐ダイナミクスを研究するための簡単で堅牢な方法を実証する。 これは、生体外で...

その場で 急性 エクスビボ 胚性脳スライス培養における軸索成長および成長円錐ダイナミクスの可視化

前進するためには、成長コーンは外部環境に対して牽引力を発揮しなければならない。牽引力の生成はアクチンの動態およびクラッチの結合に依存する。本研究では、成長コーンアドバンスのためのアクチンダイナミクス、クラッチカップリングおよび牽引力を分析する方法について説明する。...

アクチンダイナミクス、クラッチカップリング、成長コーンアドバンスの牽引力の解析

学ぶ神経成長円錐におけるF-アクチン両端の可視化法。サポニン透過処理とローダミン-アクチン標識により、アクチン動態を蛍光顕微鏡で定量化し、軸索誘導因子の影響を解析する。

透過処理神経成長円錐におけるローダミン-アクチンとF -アクチンばら両端にラベルを付ける

さらに動画を探す