雌マウスモデルにおける乳房腫瘍進行の生物発光イメージング

ルシフェラーゼ発現乳房腫瘍細胞を注射した雌マウスから始めます。

腫瘍細胞は注射部位で増殖し、原発腫瘍に発展します。

マウスを麻酔の流れのあるイメージングチャンバーにマウスを置き、マウスを麻酔します。

そして、ルシフェラーゼの基質であるルシフェリンを麻酔したマウスに注入します。

ルシフェリンは循環して腫瘍細胞に入り、ルシフェラーゼと反応して生物発光を放出します。

イメージングシステムを使用して、マウスから生物発光シグナルをキャプチャします。

時間が経つにつれて、腫瘍は原発部位で進行し、肺に転移します。

マウス画像を一定間隔で取得し、関心領域を定義します。

生物発光強度に基づいて、両方の部位の腫瘍増殖動態を構築します。

時間の経過とともに、原発腫瘍部位でのシグナルの着実な増加は、継続的な腫瘍増殖を示しています。

しかし、後の時点で肺生物発光が急激に上昇することは、腫瘍細胞の転移を示唆しています。

まず、4T1細胞株を補給されたダルベッコの修飾イーグル培地またはDMEMで維持します。細胞を摂氏37度で、二酸化炭素5%を含む加湿雰囲気でインキュベートします。

4T1細胞株にLuc2遺伝子をトランスフェクトし、構成的に産生される生物発光酵素であるルシフェラーゼを発現させます。細胞をインキュベートして、マウス注射の準備を整えます。

Balb-C雌マウスを麻酔して準備してから5分後、1ミリリットルのインスリン注射器を使用して、10乗5のルシフェラーゼ発現4T1細胞を左背に皮下注射します。注射後4週間動物を収容します。

イメージングのために、麻酔をかけたマウスを生物発光イメージング装置の指定された領域内の背側臥位に置きます。100マイクロリットルのD-ルシフェリン溶液を15ミリリットル/ミリリットルの濃度でマウスに腹腔内注射します。

イメージングパラメータを調整するには、エミッションフィルターを励起せずに開き、ビニングを8に、Fストップを2に、視野タイプをDに設定します。各イメージングエンドポイントで各動物について20分間にわたって20枚の生物発光画像をキャプチャし、画像が60秒の信号統合を表すことを確認します。

装置のソフトウェアを使用して、原発腫瘍と肺転移シグナルを区別するための特定の関心領域を定義します。注射部位および転移が起こる胸部領域の生物発光シグナルを特定します。生物発光シグナル強度に基づいて腫瘍の進行を計算します。

毎週収集された画像を使用して、原発腫瘍部位と転移部位の両方で経時的なシグナル強度の変化を表す成長動態プロファイルを構築します。シグナル強度の傾向を比較して、腫瘍の進行と転移を分析します。