セルロース産生細菌からの細菌ナノセルロースペリクルの製剤

マンニトールを含む栄養培地を詰めたマイクロプレートを用意してください。

各井戸にセルロース産生細菌を接種し、静的条件下で培養します。

培養中、細菌はマンニトールを取り込み、それをグルコースに代謝します。

このグルコースは細菌の膜に埋め込まれたセルロース合成酵素複合体に運ばれ、グルカン鎖に重合されます。

これらの鎖は細胞外空間に押し出され、そこで微小線維に結晶化します。

マイクロフィブリルはリボン状の構造に束ねられ、三次元のナノセルロースマトリックスを形成します。

ナノセルロースが増えるにつれて、空気と液体の界面に蓄積し、井戸の形状に成形されたゼラチン質のペリクルに厚くなります。

ペリクルを採取し、アルカリ性溶液で培養して細菌細胞を溶解し、残留培地を除去します。

ペリクルを水で繰り返しすすすぎて、残ったアルカリ性溶液を取り除きます。脱水を防ぐためにペリクルを水に浸して保管してください。その後、蒸し滅菌して今後の用途に備えて無菌性を確保します。

24ウェルの組織培養プレートの各ウェルに2ミリリットルの液体培養培地を移します。接種されたペトリ皿から接種針を使った2つのコロニーをステップアップさせ、組織培養皿の最初のウェルに入れます。残りの23井戸についても同じ手順を繰り返します。

組織培養プレートを30度の温度で7日間培養します。これにより、直径16mm、厚さ約2〜3mmの合計24個のBNCペリクルが得られます。培地からBNCペリクルを採取し、1%水酸化ナトリウム溶液200ミリリットルで50度摂氏で1時間滅菌し、 G. xylinusの痕跡をすべて除去します。

溶液を捨て、新たに調製した1%水酸化ナトリウム溶液を200ミリリットル加えます。同じプロセスをもう一度繰り返すか、溶液中のBNCペリクルが半透明になるまで繰り返します。BNCペリクルは水で3回洗い流し、高純度の水で室温で保存してください。

BNCペリクルは完全に水に浸し、乾燥させないようにしてください。その後、BNCペリクルを121度の温度で20分間オートクレーブします。