海水サンプルから選抜的に分解する海洋細菌の濃縮と分離

まず、炭化水素を分解できる細菌を含む多様な微生物群集を含む海水サンプルから始めます。

微生物密度を減らすために、食塩水で試料を連続希釈します。

原油を滅菌蒸留水に加え、混合液を攪拌して油の炭化水素成分を部分的に溶解させます。

混合物を沈殿させ、水溶性と不溶性の油分に分けます。

各油分を唯一の炭素源として選択的寒天プレートを準備し、可溶性または疎水性炭化水素を分解する細菌のために濃縮します。

希釈した海水サンプルを選択培地にプレートし、常温で培養します。

出現するコロニーは、ヒドロキシラーゼやジオキシゲナーゼなどの酵素を用いて炭化水素を代謝します。

形態的に異なるコロニーを選び、同じ油分を含む新鮮培地に再ストリークすることで、炭化水素分解性細菌の純粋な培養を得る。

この方法は、油分分解性の海洋細菌を選択的に分離することを可能にします。

油水溶性分率と油水不溶性分率のみを炭素源として最小限の培地を準備するには、底部にバルブのあるろ過フラスコに、500ミリリットルの滅菌蒸留水に1〜2%の原油を加えます。フラスコを24〜28度、150倍gで48時間かけて常に攪拌します。その後、フラスコを安定した場所に置き、溶性と不溶性の分画を分離するために10〜20分待ちます。

次に、底のフィルターフラスコを開けて油水溶性分画を新しい滅菌フラスコに移し、油水不溶性分画を保存します。次に、ブッシュネル・ハース寒天の最小培地を2本準備します。オートクレーブ処理。

油水溶性成分と組み合わせて、唯一の炭素源として500ミリリットルの寒天培地を作ります。油と水の不溶性分画も同様に使い、それぞれ約25ミリリットルをペトリ皿に移します。油分分解菌を分離するために、以前に希釈したサンプルを再利用し、各希釈液を100マイクロリットルずつ寒天培地を含むペトリ皿にピペットしてプレートします。

プレートのネガティブコントロールを忘れずに。目標温度で1〜3日間孵化し、前回と同じように隔離手順を繰り返します。