in vitro ヒト腸内細菌叢による大腸内発酵を模倣するバッチカルチャーモデル

まず、栄養豊富な培地とあらかじめ水和された発酵性繊維を含む嫌気性チャンバー内にチューブを挿入します。

チューブ内の酸素不足の状態は、人間の大腸の嫌気性環境を模倣しています。

次に、腸内微生物を含む希釈・均質化された糞便サンプルをチューブに入れて培養します。

チューブを定期的に逆さにして微生物と繊維を混ぜてください。

培養中、微生物は嫌気性に繊維を代謝・発酵させ、短鎖脂肪酸やその他の代謝物を生成して培地のpHを低下させます。

発酵混合物からアリコートを定期的に採取し、代謝物の生成を監視しpHを測定します。

アリコットを低温で遠心分離し、微生物のバイオマスをペレットに分離します。

代謝物と短鎖脂肪酸を含む上清液を新しいチューブに移します。

微生物バイオマスと上清液の両方を液体窒素で凍結します。

最後に、サンプルを低温で保存してさらなる分析を行います。

接種チューブは嫌気性チャンバー内で37度の温度に保ち、1時間ごとに優しく反回転させて繊維と接種物を再懸浮させます。3、6、9、または24時間後に、適切な発酵培地を取り出し、14,000 gで4度Cの環境で10分間遠心分離します。

上清液とペレットをすぐに液体窒素で凍結し、スナップ冷凍後に上清液を短鎖脂肪酸分析のために保存し、マイクロバイオーム分析のためにペレットをマイナス80度で保存します。