JoVE 実験百科事典
微生物学
0 回視聴 • 4:19 分 • February 2nd, 2026
培養皿 を用いて 、目的の細菌が腸腔内に定着している。
皿には既知の細菌株が食品として入っています。ミミズを飢えさせて細菌を全部食べさせ、休眠状態に入る。
培地を加えてミミズをチューブに移します。
遠心分離機で上澄液を捨てます。
洗剤溶液を加え、表面に付着した細菌を除去するために攪拌し、再度遠心分離機をかけて上清液を捨てます。
洗いを繰り返し、ミミズを新しい培養皿に移します。
這うようにして、表面や腸内腔からゆるく結合した食物細菌を除去しつつ、腸内に安定して定着する目的の細菌は保持します。
移送と這う手順を繰り返し、食物細菌を完全に除去してください。
培地を加え、ワームを時計のガラスに移し、腸を解剖して露出させます。
対象の細菌を含む腸を解剖し、水で満たされたチューブに集めて冷凍保存します。
ミミズを飢えさせ、OP50-1菌の数を減らすために、線虫を20度Cで3〜4日間培養します。最近飢餓したミミズのプレートに5ミリリットルのM9培地を加え、その後、M9培地とワームを無菌の15ミリ遠心分離機管に移し、室温で1,000 倍g で30秒間スピンダウンします。
上清液を除去する前に、0.05%トリトンX-100を含むM910101010101010101010mlをNutatorで20分間洗い流します。最後の洗浄後、ペレットを乱さずに上清液を除去し、100マイクロリットルの溶液に入り、M9とワームをシードされていない6センチメートルNGMプレートに移します。ミミズが這い回る間、20分間プレートを乾かし、OP50-1をキューティクルと腸から除去します。
プレートが乾燥したら、同じ手順を繰り返し、M9を250マイクロリットル追加し、ミミズを新しい未シードの6センチメートルNGMプレートに移し、プレートが乾燥する間ミミズが這い回れるようにします。
20分後に、M9を250マイクロリットルプレートに加え、100マイクロリットルのM9とワームをきれいな時計ガラスに移します。
次に、26ゲージの注射器針で線虫の首を切り落とし、別の26ゲージの注射器で虫を押さえつけます。
首を切断すると、腸、顆粒状の塊、透明な生殖腺が自然に線虫体から離れ、露出した腸の一部を切り取って、1つの切り離した腸を10マイクロリットルの無菌水を含む0.5ミリリットルのPCRチューブに移します。この手順を繰り返し、少なくとも5匹の異なる動物からPCRチューブで腸を採取します。
PCRチューブはマイナス80度で最低5分間凍結してください。PCRと同定のためのシーケンスを行う前に腸サンプルを解凍してください。