カエノラブディティス・エレガンス関連細菌の単離と培養

まず、各ウェルに滅菌ビーズとバッファーを入れたマルチウェルプレートから始めます。

各井戸に C. elegans 線虫を加え、その細菌群集を分離します。

均質化装置を使い、線虫を機械的に破壊して細菌をバッファーに放出します。

遠心分離機で細胞残骸を分離し、細菌を含む上清液を採取します。

希釈した細菌溶液を、多様な組成を持つ選択的栄養素寒天プレートにプレートし、多様な細菌タイプの増殖をサポートします。

培養皿を培養して細菌が増殖し、目に見えるコロニーを形成できるようにします。

滅菌ループを使い、単一の孤立したコロニーを選び、同じ培地の新しいプレートにストリークします。

純粋な細菌コロニーの成長を可能にするために培植します。

各純粋なコロニーを対応する液体培地に接種し、培養します。

これらの細菌は純粋な培養物に成長し、それぞれが C. elegansに自然に関連する細菌種を表します。

細菌を分離するために、約3つの無菌1ミリビーズ、1孔あたり20マイクロリットルのM9バッファーを用意した96ウェルプレートを準備し、できるだけ少ない液体で洗浄線虫を1個ずつピペットします。線虫を分解してからビーズホモジナイザーを使用し、その後プレートを短時間遠心分離して液体を底に沈めます。終わったら、サスペンションを集めて1〜10の割合で連続的に薄めます。

最大100マイクロリットルの希釈懸濁液を9センチメートルの寒天プレートにプレートします。その後、プレートを15〜20度の温度で24〜48時間孵化します。純粋な細菌培養を得るには、無菌ループやつまようじで培養皿から単一のコロニーを抽出し、精製時に使用した同じ寒天培地を含む新しい寒天プレートにストリークします。プレートの3分の1だけを使うようにしましょう。

次に、再利用可能なループを滅菌するか、新しい滅菌ループを使って最初のストリークにドラッグして、サンプルプレートの別の3分の1に2つ目のストリークを作ります。これを繰り返して、2つ目のストリークにループをドラッグし、3つ目のストリークを作ることで単一の植民地成長を実現します。

分離に使うのと同じ成長条件下で培養し、必要に応じて精製工程を繰り返します。純粋なコロニーを液体培地で同じ温度と成長条件で培養します。