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栄養寒天をフィルターペーパーの上に置いた蓋付きのバイアルを用意してください。
病原性細菌の懸濁液をフィルターペーパーに塗布します。
飢えたショ ウジョウバエメラノガスター のバエをバイアルに入れ、蓋をします。孵卵して摂食を許可し、細菌の摂取を確実にしてください。
摂取した細菌は腸内に入り、腔内を覆う保護膜を通過します。
細菌は下の上皮に付着し、上皮損傷や侵入を促進する毒素を放出し、内部組織に定着します。
ハエをアルコールに浸して表面の細菌を除去し、その後すすいでアルコールを除去します。
バッファーを加えて均質化し、内部の細菌成分を放出します。
マイクロプレート上でホモジネートを連続希釈します。次に、希釈したものを栄養寒天にプレートし、培養してコロニー形成を許可します。
コロニー数を数えて、ハエの口腔感染によって生じる生存可能な細菌細胞の数を把握してください。
口腔感染の2〜4時間前に、ハエを餌のない標準寒天バイアルに移します。その間に、ハエごとに感染バイアルを用意してください。
まず、7ミリリットルのサンプルチューブの蓋に標準的な砂糖寒天500マイクロリットルを詰めて固化させます。次に、フィルターペーパーの円盤を赤天に差し込みます。その後、100マイクロリットルの細菌培養液を直接フィルターディスクにピペットで移します。コントロールには5%ショ糖水を使います。
飢餓期間が終わった後、単一のフライを準備されたチューブに移します。ハエを18〜24時間抱卵した後、表面で滅菌します。個人を70%エタノールの100マイクロリットル入ったチューブに入れます。
20〜30秒後にエタノールを取り出し、100マイクロリットルの三重蒸留水に置き換えます。さらに20〜30秒後に水を取り除きます。次にPBSを100マイクロリットル追加し、フライを均質化します。
ホモジネートを96ウェルプレートの上段に移し、下の各ウェルに1xPBSを90マイクロリットル追加します。その後、10マイクロリットルのアリコートを用いて連続的に希釈し、さまざまなCFU値を区別します。次に、連続希釈液をLB栄養寒天プレートに5マイクロリットルの液滴でプレートします。
水滴をプレート上で目立たない位置に配置してください。その後、プレートを一晩孵化させます。翌日、希釈によって10から60の明確に見えるコロニーが生成されるCFUの数を計算します。