ショウジョウバエにおける感染伝播の可能性を評価するための細菌脱出の定量化

まずは、腸内に定着する細菌病原体に感染した ショウジョウバエ のバエから始めます。

ハエを無菌管に移し、その中にハエの餌を詰めます。

ハエはそのまま食べさせてください。

ハエの腸内では、病原性細菌が食べ物の栄養素を利用し増殖します。

ハエが排泄すると、一部の細菌も放出されます。

一定期間の後、フライを新しい餌の入ったチューブに移し、このプロセスを何度も繰り返します。

そして、最後のチューブからフライを捨てます。

各チューブにバッファーを入れ、バエの排泄物から細菌を放出するためにボルテックスを用意します。

各チューブから回収した溶液を連続的に希釈します。

希釈した溶液を栄養寒天プレートに置き、細菌コロニーの成長を待つために培養します。

コロニー数を数えることで、感染したハエが時間とともに排出する生存可能な細菌の数を測定し、感染を媒介する可能性を反映します。

細菌の脱落を測定するために、単一のハエを約50マイクロリットルのルイス培地を含む1.5ミリリットルのチューブに移します。

チューブは24時間ごとに交換してください。3本のチューブを24時間埋めた後、ハエを処分してください。各移植後、チューブ内の細菌を測定してください。

チューブの内容物に100マイクロリットルのPBSをボルテックスで混ぜます。次に、連続希釈をメッキして混合物中のCFUを測定します。