成虫蚊における明確な腸内細菌集団の確立

まずは成虫の蚊を入れた紙コップから始め、逃げないようにガーゼで密封します。

抗生物質を含むショ糖溶液に浸した綿球をガーゼの上に置き、湿度を維持するためにペトリ皿で覆います。

蚊は餌を摂る際に抗生物質を摂取し、内因性腸内細菌叢を排除します。

綿を取り除き、蚊の腸から抗生物質の残留を取り除くために飢餓期間を開始します。

スクロース溶液に細菌を懸浮させ、摂食刺激剤を添加して摂食を促すチューブを用意してください。

密閉されたフィーダーユニットに細菌の懸濁液を詰めて固定します。

ユニットを予熱した給餌装置に接続し、飢えた蚊を入れたカップの上に置きます。

蚊が餌を取る間、細菌は腸内に入り込み、定着して明確な細菌集団を形成します。

この細菌集団を運ぶ餌を与えられた蚊は、宿主と病原体の相互作用研究に適しています。

抗生物質を含むスクロース溶液に滅菌綿球を浸し、蚊が入った紙コップの上に置きます。

綿球を10センチのペトリ皿で覆い、水分の蒸発を防ぎます。綿球は1日2回交換し、3日間連続で蚊に餌を与えてください。細菌溶液を準備します。紫外線可視光度計で細菌溶液を測定します。EPチューブにODバクテリアの懸濁液を1つ追加します。

サスペンションを5,000 RCFで4度で5分間遠心分離します。

上清液は捨てる。細菌性ペレットは滅菌PBSバッファーで3回洗います。細菌ペレットを200マイクロリットルの無菌PBSバッファーで再懸浮させます。新しいEPチューブに10%ショ糖溶液600マイクロリットル、ATP200マイクロリットル、細菌懸濁液200マイクロリットルを加え、よく混ざります。準備済みの細菌溶液をゆっくりとフィーダーユニットに最大量まで加えます。

気泡が一方向から落ちてフィーダーユニットを密閉するのを防ぐために、電源を接続してください。気温が37度に達するまで待ちましょう。給餌器に細菌溶液を塗った給餌器を設置してください。細菌に餌を与える前に、抗生物質を代謝するために24時間蚊を止めるべきです。餌場を蚊の入った紙コップの上に置き、90分間餌をあげます。完全に膨らんだ蚊はさらなる研究のために特定できる。