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年齢に合った新生マウスの子犬から始めましょう。
各子犬の首の後ろの皮膚を優しく持ち上げます。1匹の子犬に低濃度の病原性細菌の懸浮液を皮下注射し、もう1匹に高濃度の懸濁液を注射します。
これらの細菌はルシフェラーゼ酵素とその基質を生成する生物発光オペロンを発現し、自律的な光の放出を可能にします。
保護用の多糖カプセルが細菌を包み、表面抗原を覆い隠して、子の免疫細胞による認識を防ぎます。
子犬は生物学的な母親のもとに返して産後のケアを受けてください。
注射部位での細菌増殖は炎症と血管透過性の増加を引き起こし、細菌が血流に侵入し全身に広がることを可能にします。
麻酔をかけた子犬を発光イメージングシステムの下に置く。
ルシフェラーゼは基質を酸化して可視光を発生させ、子犬の内部の細菌を可視化できるようにします。
高濃度・低濃度の細菌接種を受けた子犬の細菌増殖と広がりを比較するために、時間をかけて画像を撮影します。
まず、年齢に合った子犬をバイオセーフティレベル2のキャビネット内で高用量または低用量の子育てグループに入れます。出生後3日目か4日目には、接種前にすべての子犬の体重を記録します。
インスリン注射器にはPBSや高用量・低用量 のEを充填してください。大腸 菌をバイオセーフティキャビネットに接種し、注入済みの注射器を氷の上に置く。
注射される新生児をバイオセーフティキャビネット内のきれいな表面に置き、首の後ろの皮膚をまるで子犬の首根をかき立てるように持ち上げます。針の面取りを皮膚と筋肉の間の隙間に、皮膚のすぐ下に挿入します。針が皮膚の下に触れられるようになったら、50マイクロリットルの接種剤を注射しつつ、逆流を防ぐために圧迫された皮膚部分を同時に解放します。その後、ゆっくり慎重に針を抜きます。
すべての子犬が同じ方法で注射されたら、子犬を母親の元に戻してください。注射直後、適切な実験時間に、ケージに Eを入れて置きます。大腸大腸 ラックス感染した新生児マウスとDAMをバイオセーフティレベル2の層流フードに設置し、マイクロCTコンピュータでソフトウェアを開きます。システムを初期化し、ステージ温度が37度でロックし、CCD温度がマイナス90度でロックするのを待った後、最大4体の麻酔を受けた子を画像室の画像ボックスに伏せの姿勢で配置します。
イメージングチャンバーの扉を閉めて、発光イメージングオプションを選択します。開フィルターを選択し、次に設定し、励起フィルターをブロック、放出フィルターを開けに設定します。500、520、560、580、600、620ナノメートルを選びましょう。
その後、子犬を画像診断して、ダム付きのケージに戻し、麻酔回復まで監視します。