マウスにおける細菌性リポ多糖の腹膜内注射による全身免疫反応の研究

まずは目覚めたネズミを動きを制限して拘束します。

頭を下に傾けて下腹部を露出させます。

腹部の正中線を特定し、内臓を避けるためにやや中心からずれた注射部位を特定します。

次に、グラム陰性細菌の細胞膜に含まれるリポ多糖溶液を含む注射器を用意します。

腹膜腔にアクセスするために針を挿入し、溶液を注射します。

注射されるとLPSは全身循環に入り、免疫反応を引き起こします。

血流中でLPSはLPS結合タンパク質に結合し、免疫細胞の膜タンパク質であるCD14に移します。

CD14はLPSをトール様受容体4(TLR4)と結合する糖タンパク質MD-2にLPSを届け、TLR4二量体化を可能にします。

二量化したTLR4は、下流のシグナル伝達経路を活性化するアダプタータンパク質をリクルートし、炎症促進サイトカイン発現と全身炎症を誘導します。

これは細菌産物によって引き起こされる腸やその他の臓器における微生物の転座や全身免疫活性化をモデル化します。

ネズミを優しく、しかししっかりと扱い、片手で拘束してください。マウスがしっかり固定され、正常に呼吸できるようにしてください。

注射のために腹部を露出させるために、マウスの鼻を少し床に傾けます。腹部の正中ラインを見つけ、左下または右に必要なLPSの量を注射します。

誤注射を防ぐために、針が腹膜腔内に確実に入ることを確実にすることが非常に重要です。

また、内臓の損傷を避けるために、針は腹膜腔の奥深くに入りすぎないようにしましょう。

優しく動物をケージに戻します。

注射時およびその後2時間ごとに8時間にわたり、マウスの内毒素血症の発生と重症度を監視してください。添付のスコアシートに観察記録を残してください。