生存アッセイを用いたC. elegansにおけるエアロモナスの病因モデル化

まずは栄養豊富な培地で培養する細菌病原体である エアロモナス 株の培養から始めます。

培養物の光学密度を測定し、細菌濃度を調整して感染負荷を一定に保ちます。

培養液を線虫培養培地(NGM寒天)にプレートし、均一な細菌層を形成するために培養します。

発達的に同期した C. elegans 幼虫を調製します。これは濃縮培地上で維持された細菌食線虫です。

幼虫を細菌層に移し、ア エロモナスの 経口摂取を可能にして腸内定着を可能にするよう培養します。

宿主内で細菌は増殖し、腸の上皮細胞を損傷するサイトトキシンを放出し、死亡を引き起こします。

生き残った線虫を新鮮な細菌プレートに移し、生きている、死んでいる、反応しないワームの数を毎日数え、最後のワームが死ぬまで数えます。

最後に、宿主の生存可能性を時間経過で評価するための生存曲線を生成します。

まず、4つの エアロモナ ス株それぞれのコロニーを選び、テキストプロトコルに従って培養します。次に、細菌ブロスの吸収率_OD600 を測定し、吸収度を2.0にするまで調整します。

次に各株から30マイクロリットルの細菌ブロスをNGMプレートに塗布します。

事前に準備されたL4線虫をランダムに選択し、エアロモナス株のNGMプレートに移します。その後、アッセイが完了するまで20度の温度で培養します。

毎日、すべての生きたミミズを新しいNGMプレートに細菌を移します。生きている、死んでいる、センサーのワームの数を毎日数え、最後のワームが死ぬまで数えましょう。