オートファジーを媒介した細胞内細菌のスクリーニング除去の調査

豚の腎臓細胞培養を取り、そのうち1培養はリソソームpHを上昇させる阻害剤で事前に処理され、オートファジックリソソーム分解を妨げます。

病原菌と遠心分離機を加えて宿主と病原体の接触を強化します。

細菌の侵入と内胞性小胞への内部化を可能にするためにインキュベートします。

体内化された細菌は宿主の栄養素を消費して複製し、代謝ストレスを引き起こします。

このストレスはオートファジーを活性化し、小胞の周囲にオートファジー膜が広がってオートファソームを形成します。

未処理の細胞では、オートファゴソームがリソソーム分解のために細菌を標的にします。

阻害剤処理細胞ではオートファジッククリアランスが損なわれ、細菌負荷が増加します。

感染後は細胞を洗浄し、抗生物質を塗布して細胞外細菌を除去します。

細胞外マトリックスを消化し、細胞を外す酵素を加えます。

細胞を機械的に溶解して細胞内細菌を放出します。

分解液をプレート状にして細菌の増殖を可能にします。

未処理細胞からのコロニー数が減少したことで、細胞内細菌の除去におけるオートファジー-リソソーム分解経路の役割が確認されます。