水サンプル中の生存可能な 大腸菌 検出のためのファージベースのマイクロ流体アッセイ

まず、大 腸菌を含む糞便大腸菌群を含みやすい汚染水サンプルから始めましょう。

濁度と微生物負荷を減らすために蒸留水で連続希釈を行います。

希望の希釈サンプルを栄養培地と混合し、マイクロフルイディックチップに詰めます。

真空ろ過を使って、チップの蛇行チャネル内の膜に細菌を捕捉します。

上部チャンバーに栄養培地を加え、細菌の回復を促進するために培養します。

培地をルシフェラーゼ遺伝子を持つ 大腸菌特異的ファージの溶液に置き換えます。

インキュベークしてファージ感染を許可し、ファージDNAが複製し、宿主DNAを分解し、新しいファージを生成しルシフェラーゼを産生します。その後、感染した細胞は溶解してルシフェラーゼを放出します。

ルシフェラーゼを捕捉膜に移すために真空ろ過を適用します。

ルシフェラーゼと反応して発光信号を生成する基質を加えます。

光電子増倍管を用いて、水試料中の生存可能な 大腸菌 細胞数に比例する発光を測定します。