Wnt5Aを媒介したマウスマクロファージにおける細菌クリアランスの増強

マウスマクロファージの付着培養を例にとりましょう。

テストはWnt5A(シグナル伝達分子)を含むバッファーで丁寧に処理し、対照群はバッファーのみで処理します。

細菌性病原体に感染させて孵化します。

テスト細胞では、Wnt5Aがシグナル伝達カスケードを活性化し、細胞骨格の再編成を促進して細菌のファゴソームへの取り込みを促進しますが、このシグナル伝達を欠く対照細胞は体内化する細菌の数が少なくなります。

体内に入っていない細菌を除去するために洗浄し、その後抗生物質を含む培地で培養して残った細胞外細菌を除去します。

Wnt5Aシグナル伝達は、細菌を含むファゴソームをリソソームと融合させる準備をし、細菌の分解を可能にします。

一部の細菌はファゴリソームを破って逃げ出します。

対照細胞では、ファゴソーム成熟が限られているため、逃げ出が増加します。

決められた時間点で細胞を採取します。蒸留水を加えて浸透圧ショックを誘発し、細胞を溶解させて細胞内細菌を放出します。

溶解液を寒天プレートに広げて培養します。

Wnt5A処理細胞におけるより大きな時間依存性細菌減少を評価するためにコロニー数を数えます。