細菌に感染した免疫細胞におけるMHC-I抗原提示の障害評価

まずは病原性細菌に感染し、細胞内包有体を形成する免疫細胞培養から始めます。

細菌感染は免疫細胞内の抗原提示経路を損なう。

対照として、感染していない培養を例に取りましょう。

次にモデルタンパク質抗原を加えて培養します。

免疫細胞はモデル抗原由来ペプチドを体内化し、処理し、MHC-I分子に提示します。

培養後は未処理の抗原を除去するために細胞を洗浄します。

細胞を固定し、次に固定剤を中和するために焼光剤を加えます。

遺伝子操作されたCD8+ T細胞を導入し、インキュベーションします。

これらの細胞はMHC-I分子に示された抗原断片を認識し、活性化され、MHC-I媒介抗原提示のマーカーとなる酵素を分泌します。

次に、酵素と反応して比色信号を生成する基質を加えます。

吸収度を測定してください。感染細胞培養で未感染培養に比べて吸収度が低下することは、細菌感染によるMHC-I抗原提示効率の低下を示しています。