陽イオン性染料基アッセイを用いた細菌バイオフィルム形成の評価

まずは栄養培地中の細菌懸濁液から始めます。

サスペンションをマルチウェルプレートに追加して孵化します。

培地中の栄養素は細菌の増殖と付着を促進します。

接着した細菌は、多糖類、タンパク質、DNAからなる細胞外高分子物質を分泌し、バイオフィルムの層を形成します。

バッファーで何度も洗って、結合していない細菌を除去してください。

プレートを逆さにして、井戸から残留液体を除去し、バイオフィルムを乾燥させます。

バイオフィルムの細胞成分を保護するために固定剤で処理してください。

バイオフィルムの細胞外高分子成分に負に帯電する陽イオン性染料を加えます。

バッファーで洗い流し、何度か繰り返して未結合染料を落とします。

溶剤を加えてバイオフィルム結合染料を放出します。

プレートリーダーを使い、細菌によるバイオフィルム形成の表示として、放出された染料の色の強さを測定します。