C. elegans液体毒性アッセイを用いた細菌病原性の評価

対照として使われる非病原性細菌の懸浮液を含むマルチウェルプレートと、さまざまな病原性細菌株を組み合わせて、その相対的な病原性を評価する。

細菌は過剰増殖を防ぎ、感染に適した環境を模倣するために栄養が限られた培地に懸浮しています。

各ウェルにL4段階の C. elegans の線虫を加え、細菌とミミズの接触を促進するために連続攪拌下で培養します。

ミミズは細菌を餌にし、細菌は腸内に入り巣食を増やします。

病原性細菌は腸組織を損傷する毒素を放出し、体内の毒性や最終的な死を引き起こします。

孵化後、各井戸内の生きたミミズ数を数え、その生存率を評価するグラフを作成します。

線虫の生存率の違いは、各細菌株の相対的な病原性を反映しています。

エアロモナス菌株を培養し、前述の通り吸収度を測定した後、細菌ブロスを3,500gで15分間遠心分離します。S培地で細菌ブロスを調整し、S培地に195マイクロリットルのバクテリアブロスを96ウェルプレートの8ウェルに加えます。M9メディウムでENGMプレートの虫を洗い流してください。次に、ミミズ溶液の濃度を1マイクロリットルあたり5個に調整します。

96ウェルプレートの各ウェルに5マイクロリットルのワーム溶液を加えます。皿をシェイカーで孵化し、24時間、48時間、72時間で生きたミミズの数を数えます。