病原性エアロモナス株によるC. elegansの筋肉壊死アッセイ

まずは、病原性細菌 エアロモナスの芝生を含む栄養豊富な線虫成長培地から始めます。

筋肉特異的なGFPを発現するL4ステージの C. elegans 寄生虫を細菌の芝生に移し、培養します。

ミミズは栄養分とともに細菌を摂取します。これにより細菌は腸に到達し、定着することができます。

特殊な分泌システムを用いて、 エアロモナス は寄生虫の腸細胞に病原性因子を届けます。

これらの病原性因子は体壁に拡散し、筋肉を乱して構造的損傷や壊死を引き起こします。

ミミズを毎日新しい皿に移し、細菌の芝生を敷いて病原体への継続的な曝露を維持します。

麻酔剤を補助したアガロースジェルに寄せて麻酔し、その後カバースリップを敷きます。

GFPフィルターを用いて、一定間隔で蛍光画像を撮影します。

GFPシグナルの進行性喪失は 、C. elegans における筋肉の障害を示しており、宿主と病原体の相互作用における エアロモナス誘発性の筋肉壊死を表しています。

エアロモナス菌株を培養し、テキストプロトコルに従って吸収を調整した後、細菌ブロスを点滴してNGMプレートに広げます。

その後、各NGMプレートに50個のL4線虫を移します。24時間ごとにミミズを新しいNGMプレートに移します。ランダムに10個のミミズを選び、スライド上でM9培地の2%アガロースゲルに移します。

最後に、ゲルの上にカバースリップを配置し、緑色の蛍光タンパク質フィルターでカメラ付きの蛍光顕微鏡で筋肉画像を撮影します。