細菌ハイドロゲルパターンのカール繊維媒介安定化

3Dプリントされたアルギン酸マトリックスを2皿取り、それぞれに対照菌株または試験菌株を封じ込めています。

両株とも視覚化のために蛍光タンパク質を一貫して発現します。この試験株には、カーリ繊維と呼ばれるタンパク質質の細胞外繊維を産生するための誘導遺伝子も含まれます。

パターンは固い媒体に印刷され、カルシウムとラムノーズが加えられています。

カルシウムイオンがアルギン酸塩を架橋し、ハイドロゲルを形成するために培養します。

試験株では、ラムノーズがカールサブユニットの生成を誘導し、細胞表面で自己組み立てして繊維となります。

蛍光スキャナーを使ってパターンを撮像してください。

カルシウムキレート溶液で処理し、振ってカルシウムイオンを隔離するよう培養します。これによりアルギン酸の架橋が破壊され、ハイドロゲルが溶解されます。

解を捨ててパターンを再イメージしてください。

処理によりコントロールパターンは溶解しましたが、カールファイバーの安定ネットワークによりテストパターンはそのまま維持されました。

プリントサンプルを室温で3〜6日間培養し、カーリ繊維などのバイオフィルム成分の生成を促します。

次に、プレートを蛍光スキャナーに置き、画像化します。

アルギン酸塩マトリックスを溶解するには、pH7の0.5モルシトウム酸ナトリウム溶液をプリント基板に20ミリリットル加え、室温で30rpmで振って2時間培養します。

その後、液体を捨てて再度プレートを撮影し、シトレート処理前後のプレート画像と比較します。