細菌外多糖分解を評価する薄層クロマトグラフィーの実施

分解済みおよび未分解の外多糖(EPS)を含む発酵上清液から始めましょう。

これらのEPSは発酵中に得られ、各上清液に含まれる異なる糞便細菌群がEPSに異なる作用を示します。

極性固定相であらかじめコーティングされた薄層クロマトグラフィープレートの基部付近に上清液を見つけます。

プレートを自然乾燥させた後、固定相よりも極性の低い移動相を含むチャンバーに入れます。

移動相が上昇するにつれて、EPSはその極性やサイズに基づいて移動します。

大きくて劣化していないEPSは定常相と強く相互作用し、原点付近に留まります。

小さく劣化した断片は弱く結合し、移動相とともに上昇します。

プレートを外して自然乾燥させます。

プレートをEPSと反応する炭水化物染色試薬に浸します。

プレートを自然乾燥させてから加熱し、EPSを脱水させて色帯を形成します。

起点近くの単一のバンドはEPSの分解未確認を示し、複数のバンドは細菌によるEPS分解を確認させます。

発酵した上清液を0.2マイクロリットルを、60TLCのアルミニウム板にあらかじめコーティングされたシリカゲルに注ぎ、渦巻きして広げます。その後、熱風を吹いたドライヤーで乾かします。

サンプルプレートの一端を20ミリリットルの蟻酸:n-ブタノール:水溶液に数分間浸し、電気泳動がほぼ反対側まで広がるまで続けます。その後、鉗子でプレートを取り出し、ヘアドライヤーで乾かします。その後、プレートをオルシノール試薬に2分間浸して染め、再び乾燥させます。

皿を120度のベーキングオーブンに移し、3分間加熱します。その後、プレートの写真を撮ってTLCバンドを測定してEPSの劣化を評価します。