0 閲覧数 • 2:23 分 • March 31st, 2026
分解済みおよび未分解の外多糖(EPS)を含む発酵上清液から始めましょう。
これらのEPSは発酵中に得られ、各上清液に含まれる異なる糞便細菌群がEPSに異なる作用を示します。
極性固定相であらかじめコーティングされた薄層クロマトグラフィープレートの基部付近に上清液を見つけます。
プレートを自然乾燥させた後、固定相よりも極性の低い移動相を含むチャンバーに入れます。
移動相が上昇するにつれて、EPSはその極性やサイズに基づいて移動します。
大きくて劣化していないEPSは定常相と強く相互作用し、原点付近に留まります。
小さく劣化した断片は弱く結合し、移動相とともに上昇します。
プレートを外して自然乾燥させます。
プレートをEPSと反応する炭水化物染色試薬に浸します。
プレートを自然乾燥させてから加熱し、EPSを脱水させて色帯を形成します。
起点近くの単一のバンドはEPSの分解未確認を示し、複数のバンドは細菌によるEPS分解を確認させます。
発酵した上清液を0.2マイクロリットルを、60TLCのアルミニウム板にあらかじめコーティングされたシリカゲルに注ぎ、渦巻きして広げます。その後、熱風を吹いたドライヤーで乾かします。
サンプルプレートの一端を20ミリリットルの蟻酸:n-ブタノール:水溶液に数分間浸し、電気泳動がほぼ反対側まで広がるまで続けます。その後、鉗子でプレートを取り出し、ヘアドライヤーで乾かします。その後、プレートをオルシノール試薬に2分間浸して染め、再び乾燥させます。
皿を120度のベーキングオーブンに移し、3分間加熱します。その後、プレートの写真を撮ってTLCバンドを測定してEPSの劣化を評価します。
このプロトコルでは、細菌の菌体外多糖(EPS)の分解を評価するための薄層クロマトグラフィー(TLC)の適用方法を実演します。EPSの分解を理解することは、微生物間の相互作用や、それが生態系に与える影響を考察する上で極めて重要です。
外多糖(EPS)分解プロファイリングのための薄層クロマトグラフィー(TLC)により、バイオ医薬品チームは微生物の炭水化物代謝を定量的な明瞭さをもって調査することが可能です。この分析能は、マイクロバイオームを標的とした治療薬探索における初期段階のターゲット検証およびメカニズムのデリスキングを支援します。信頼性の高いEPS分解評価は、下流のスクリーニングおよびトランスレーショナルリサーチに対する予測的な信頼性を提供します。
TLCに基づいたEPS分解解析は、初期探索からリード化合物同定に至る一連の流れに適合し、仮説検証とスクリーニング準備の両方を支援します。
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最終更新:29 8月 2026