ヒト腸内微生物の外核多糖活性の調査

まずは、外多糖の体外発酵中にヒト腸内細菌叢が産生する上清液から始めます。上清液には脱プロトン化された短鎖脂肪酸(SCFA)やその他の代謝物が含まれています。

メタリン酸を加えて上澄液のpHを下げ、渦を巻き込んで十分に混ぜます。これによりSCFAはプロトン化された形態に変換され、ガスクロマトグラフィー解析に適しています。

遠心分離機でゴミを分離し、SCFAやその他の代謝物を含む上清液を採取します。

残留物を除去し、クロマトグラフィーの妨害を避けるために上清液をろ過してください。

高性能ガスクロマトグラフィーシステムでは、上清液を加熱した入口に注入して気化させます。その後、蒸気と不活性ガスを混合し、極性の静止相カラムを通して分離します。

SCFAはカラムの固定相と相互作用し、揮発性に応じて分離し、短い鎖の酸が長い酸よりも早く溶出します。

異なるSCFAの濃度を内部標準と比較して特定します。これは腸様条件下での外多糖の微生物分解を反映しています

EPSがSCFA生成に与える影響を調べるには、発酵した上清液1ミリリットルを2ミリリットルの遠心分離管に加え、各サンプルに25%の重量/体積パーセントのメタリン酸0.2ミリリットルを加えます。ボルテックスで溶液を十分に混ぜます。混合物を13,000 倍g で20分間遠心分離します。

その間に、120ミリモラーの酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソブチン酸、イソバレリック酸をチューブ内に溶液準備してください。次に、各製酸を1ミリリットルずつ、重量/体積25%メタリン酸1.2ミリリットルのチューブに加え、標準的なカクテルとしてガスクロマトグラフィー装置のサンプルボトルに入れます。

遠心分離機からチューブを取り出し、上澄液を新しいチューブに移します。0.22ミクロンフィルター付きの注射器を使って、上清液を新しいチューブに濾過し、ガスクロマトグラフィー分析を行います。