成虫ゼブラフィッシュにおける ビブリオ・コレラ菌 による腸内定着と下痢誘発

成体のゼブラフィッシュを無菌感染水に入れ、所定の密度で病原性の ビブリオ・コレラ 菌株を加えます。

魚が飛び出して孵化しないように、ビーカーに穴あきの蓋をかぶせます。

ゼブラフィッシュは細菌を摂取し、細菌は腸に到達し、鞭毛を使って粘液層を通過して上皮に付着します。

彼らは上皮に定着し、腸の完全性を乱す毒素を分泌し、イオン、体液、タンパク質の漏れを引き起こします。

また、毒素は上皮粘液分泌を引き起こし、細菌の持続を促進します。

液体、粘液、腸内容物の蓄積により水性下痢が生じ、水の濁度が増加することで検出されます。

孵化後は魚を回収し、感染した水を消毒剤に捨てます。

魚を無菌水に移して表面の細菌を除去してください。

魚を採取し、再度無菌水に移してさらなる分析を行います。

コ レラ菌 の培養物を準備した後、ゼブラフィッシュに浸漬で接種します。まず、400ミリリットルのビーカーに4〜5匹のゼブラフィッシュを入れ、200ミリリットルの無菌感染水を入れます。次に、所望の感染濃度を満たすために1ミリリットルの V.コレラ 菌培養を加えます。

次に、ビーカーに穴あきの蓋をかぶせます。すべてのビーカーを準備した後、28度の温度に設定したガラスの前面インキュベーターに移します。一時的な曝露の場合は、約6時間後に魚網を通してビーカーの水を流し、魚を採取します。感染した水は漂白剤で処分され、細菌を殺す必要があります。

その後、魚を200ミリリットルの無菌感染用水に5分間浸します。5分後にこの水をフィッシュネットに通し、漂白剤で処理します。今では、魚は200ミリリットルの無菌感染水を入れた新しい清潔なビーカーに入れることができます。