マウスの再発性尿路感染症モデル化のための Gardnerella vaginalis 接種薬の製剤

マウスの尿路感染症に関連する嫌気性細菌である G. vaginalisの抗生物質耐性株を比較しましょう。

初期の膀胱感染時には、尿路病原性 大腸菌 が膀胱上皮細胞内に静止した貯蔵庫を形成します。

その後の G. vaginalis への曝露は、表層細胞の毒素媒介による脱落を引き起こし、休眠していたUPECが再発して再発性尿路感染症を引き起こします。

G. vaginalis接種物を準備するには、抗生物質を使わずに栄養寒天プレートにストリークを塗り、細菌の回復を促します。

無酸素で抱卵して活発に成長するコロニーを得る。

密集したコロニーをループで抗生物質を含まない栄養ブロスに移します。

望ましい細菌濃度に達するまで、嫌気条件下で静的に培養します。

光密度を測定して濃度を推定します。

懸濁液をチューブに移し、遠心分離機で細菌をペレットで除去し、上清液を捨ててバッファーに再懸濁させます。

連続希釈液を準備し、抗生物質含有培地に塗布してG . vaginalis の選択的増殖と汚染防止を図ります。コロニー数を数えて接種濃度を決定します。

まずは Gをサイクルさせます。陰茎 のストレスは 、マイナス80度の冷凍庫から嫌気性チャンバーへと移ります。抗生物質なしでNYCIIIプレートに細菌をストリークしてください。プレートを37度摂氏で嫌気性に24時間培養します。

嫌気性チャンバーで、嫌気性NYCIII培地5ミリリットルを、NYCIIIプレートから1マイクロリットルの細胞を充填したループを接種し、嫌気条件下で37度で18時間静的に培養します。培養培地に抗生物質は入れないでください。分光光度計を用いて培養物の_OD600 を測定します。

次に、9,600gで1分間遠心分離し、培地を吸引します。細菌ペレットをPBSに所定濃度に再懸浮させ、接種液を連続的に希釈・プレートします。