ウイルス共感染後の 肺炎連鎖球菌 の病原性移行を研究するためのマウスモデル

まずは、無症状の鼻咽頭株であるバイオフィルム培養の 肺炎連鎖球菌をバッファーに懸浮させて始めます

麻酔されていないマウスに鼻腔内で懸濁液を投与し、上気道への吸入を可能にします。

鼻咽頭上皮では、細菌がバイオフィルムを形成し、宿主細胞からの抗ウイルスサイトカイン産生を抑制します。

麻酔後、マウスの舌を伸ばして気管にアクセスする。

インフルエンザAウイルスを気管に投与し、下気道に感染させます。

マウスが回復したら、直ちにウイルスを鼻腔内に接種し、上気道を標的にします。

ウイルス感染は宿主の免疫システムを調節不能にし、粘膜組織を損傷させることで、細菌が下気道に拡散するのを誘発します。

ウイルスによって変化した肺環境では、細菌は侵襲性病原体へと移行し、肺の炎症や全身への感染拡大を引き起こします。

感染は好中球の機能を抑制し、細菌の除去を減少させます。

この共感染モデルにより、宿主と微生物の相互作用の調査が可能になります。

バイオフィルムで育てたアリコートを氷で解凍し、1,700gで5分間回転させます。ペレットを乱さないように、上澄液を慎重に取り除き捨てます。その後、ペレットを1ミリリットルのPBSに再懸浮させて洗い、再度回転させます。上清液を取り除き、ペレットを必要な量で再懸浮させて所望の濃度に到達させます。

C57黒6オスのマウスに、5×10の第6コロニー形成単位(CFU)を鼻腔内に接種し、各ナリスに希釈した接種物5マイクロリットルをピペッティングします。接種後はマウスをしっかりと抱え、頭部を安定させて体量を吸い込むまで保ちます。ウイルスが解凍したら、PBSで所定の濃度に希釈します。

麻酔前にマウスの目に眼用潤滑剤を塗布します。麻酔されたマウスに、鈍いピンセットで舌を口から引き抜き、液体の量を気管内にピペットで流すことで、20プラーク形成ユニット(PFU)50マイクロリットルのインフルエンザAウイルスまたはIAVを気管内に感染させます。回復後は、前述の接種法を用いて200 PFUのIAVを鼻腔内に10マイクロリットル接種します。